體外擴(kuò)增人臍帶血CD34+細(xì)胞移植治療新生大鼠腦癱模型的研究.pdf

1、目的：
　　 研究人臍帶血CD34+細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增后對(duì)新生大鼠腦癱模型的治療作用，并對(duì)其治療機(jī)理進(jìn)行初步探討;同時(shí)比較臍帶血單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)和CD34+細(xì)胞對(duì)新生大鼠腦癱模型的治療效果，為臨床細(xì)胞治療腦癱提供參考依據(jù)。
　　 方法：
　　 1)參照Rice法，對(duì)出生7天的SD大鼠行一側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎，結(jié)合缺氧處理的方法制作新生大鼠腦癱模型，成功建模3周后(P28)，觀察其體重、行為學(xué)及腦組織病理學(xué)改變，并檢測

2、腦組織中凋亡相關(guān)基因和轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp50和p65的表達(dá)變化。
　　 2)成功建立模型后第7天(P14)，將臍帶血MNCs、CD34+細(xì)胞和CD34+細(xì)胞體外擴(kuò)增后的細(xì)胞經(jīng)損傷同側(cè)頸靜脈移植到大鼠體內(nèi)。細(xì)胞移植2周后(P28)，進(jìn)行體重、行為學(xué)及組織病理學(xué)分析，并采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(Real-timeRT-PCR)檢測凋亡相關(guān)基因的表達(dá)變化，利用蛋白質(zhì)免疫印記法(Westernblot)檢測轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活化

3、水平。
　　 結(jié)果：
　　 1)腦缺血缺氧損傷導(dǎo)致大鼠體重下降;行為異常，主要表現(xiàn)為不對(duì)稱擺動(dòng);損傷同側(cè)大腦半球出現(xiàn)液化，腦實(shí)質(zhì)明顯減少，損傷對(duì)側(cè)未見液化現(xiàn)象;損傷同側(cè)腦組織中凋亡相關(guān)基因（TNFα、TNFR1、TNFR2、Fas和CD40），轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp50、p65表達(dá)上調(diào)。模型之間一致性、重復(fù)性好，建模成功率高。
　　 2)與損傷組比較，三種細(xì)胞治療后大鼠體重均明顯增加，腦組織損傷減輕，凋亡相關(guān)基因和

4、轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp50、p65的表達(dá)均降低;MNCs對(duì)腦癱模型的治療效果優(yōu)于CD34+細(xì)胞;CD34+細(xì)胞擴(kuò)增后對(duì)新生大鼠腦癱模型仍有治療效果，且其療效優(yōu)于CD34+細(xì)胞組。
　　 結(jié)論：
　　 應(yīng)用一側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎結(jié)合缺氧的方法制作新生大鼠腦癱模型損傷程度一致、穩(wěn)定、成功率高;MNCs、CD34+細(xì)胞及CD34+細(xì)胞體外擴(kuò)增后都對(duì)腦癱模型有一定治療作用;MNCs的治療效果優(yōu)于CD34+細(xì)胞;CD34+細(xì)胞擴(kuò)增后的神經(jīng)