漢坦病毒疫苗株Z10（HTNV）與Z37（SEOV）核蛋白表達(dá)及生物學(xué)功能研究.pdf

1、該論文主要研究了漢坦病毒疫苗株Z10和Z37核蛋白體內(nèi)、體外表達(dá),核蛋白與基因組末端反向重復(fù)序列相互作用以及核蛋白對(duì)鼠源性巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.核蛋白相對(duì)保守,常作為漢坦病毒分子進(jìn)化親緣性分析的依據(jù).為了解漢坦病毒疫苗株Z10與Z37基因分型及與其他毒株在進(jìn)化上的親緣性,克隆并序列測(cè)定了Z10和Z37核蛋白全基因.為了獲得純化的可溶性重組核蛋白,構(gòu)建了Z10和Z37株核蛋白原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)在較低的溫度(18℃)和較

2、低濃度IPTG(100mM)條件下誘導(dǎo)表達(dá)過(guò)夜可提高可溶性核蛋白的產(chǎn)量.為了解內(nèi)源性核蛋白的表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)的分布情況,構(gòu)建了漢坦病毒Z10株核蛋白基因與鼠干細(xì)胞反轉(zhuǎn)錄病毒(MSCV)重組載體,通過(guò)磷酸鈣轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入產(chǎn)病毒的包裝細(xì)胞系BOSC23中產(chǎn)生完整的重組MSCV-FlagNP病毒.然后以重組病毒直接感染NIH 3T3細(xì)胞,利用Puromycin對(duì)感染細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)壓力篩選,獲得了轉(zhuǎn)核蛋白抗性細(xì)胞.互補(bǔ)可形成雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu).為了研究該雙鏈結(jié)