烏司他丁聯(lián)合維拉帕米對大鼠急性肺缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、 目的：本實驗通過建立大鼠急性肺缺血再灌注損傷(the acute lung isc hemia reperfusion injury,TALIRI)模型,對聯(lián)合應用烏司他丁和維拉帕米對大鼠急性肺缺血再灌注損傷保護作用及其相關機制做初步實驗研究。方法：1.建立大鼠急性肺缺血再灌注損傷模型：取健康清潔大鼠(S D)90只,體重200~240g,隨機分為未阻斷組(A組),缺血再灌注組(B組),烏司他丁預處理組(C組),維拉帕米預處理組(D

2、組),以及烏司他丁聯(lián)合維拉帕米預處理組(E組),每組18只。A組：開胸后不阻斷肺門：B組：開胸阻斷肺門45min后放開放再灌注；C組：開胸前15mi n尾靜脈注射烏司他丁,余處理同B組；D組：開胸前15min尾靜脈注射維拉帕米,余處理同B組；E組：分別在開胸前15min尾靜脈注射烏司他丁與維拉帕米,余處理同B組。分別在缺血后45min、2小時及6小時3個時相點各處死6只大鼠,留取左肺標本； 2.在缺血45min、2小時及6小時3個時相點

3、分別取左下肺組織天枰稱重后計算濕干重比；取左上肺組織進行病理學觀察,測定左上肺組織勻漿中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、髓過氧化物酶(MPO)含量、一氧化氮(NO)活性及免疫組化檢測肺泡表面活性物質(zhì)相關蛋白-A(SP-A)的表達水平。結果：1.左下肺干濕重比(W/D)：A組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為3.74±0.20%、3.70±0.19%、3.30±0.50%, B組缺血45m

4、in、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為6.40±0.42%、6.33±0.40%、5.37±0.41%,C組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為4.90±0.55%、4.50±0.32%、4.61±0. 71%,D組缺血45min、再2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為4.89 ±0.47%、4.52±0.22%、4.64±0.64%,E組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織

5、W/D比值分別為 4.55±0.32%、4.10±0.45%、4.86 ±0.43%。B組W/D高于A組(P0.05)。2.左上肺組織病理學觀察結果：A組缺血45min、2h、6h組大鼠肺組織結構清晰肺泡完整,肺泡無充血水腫、無炎性滲出等改

6、變,組間病理形態(tài)評分無顯著性差異。B組各時間點大鼠肺組織均見大量炎性細胞浸潤表現(xiàn)等,以2h最明顯。C組、D組、E組各時間點大鼠肺組織有炎性細胞浸潤、肺萎縮。3.左上肺組織 MDA 濃度測定：A 組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MDA濃度分別為0.96±0.12nmol/mgprot、0.98±0.25nmol/mgprot、1.14±0.21nmol/mgprot,B組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注 6h 肺組織

7、MDA 濃度分別為 1.78 ± 0.16nmol/mgprot、1.80 ± 0.19nmol/mgprot、1.88 ± 0.22nmol/mgprot,E組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MDA濃度分別為 1.08±0.17nmol/mgprot、1.12±0.09nmol/mgprot、1.20 ±0.16nmol/mgprot。?B組、C組、D組、E組不同時間點MDA濃度比A組明顯降低(p<0.05),C組、D組、

8、E組不同時間點MDA濃度比B組明顯降低(p

9、2±2.35 U/mgprot、33.10±1.33 U/mgprot,E組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織SOD活性分別為 54.31±5.84U/mgprot、55.29±2.23U/mgprot、55.87±2.45U/mgprot。B組、C組、D組、E組不同時間點SOD濃度比A組明顯降低(p<0.05),C組、D組、E組不同時間點SOD活性比B組明顯升高(p

10、0.05)。5.左上肺組織MPO活性測定：A組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MPO活性分別為 0.66 ±0.10 U/g、0.67±0.10U/g、0.73±0.11U/g,B組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MPO活性分別為0.82±0.05U/g、0.96± 0.12U/g、1.00±0.05U/g,E 組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注 6h肺組織 MPO 活性分別 0.70 ± 0.05U/g

11、、0.76 ± 0.10U/g、0.79 ± 0.04U/g。B組、C組、D組、E組不同時間點MPO活性與A組比較明顯增高(p<0.05)。B組不同時間點MPO活性比C組、D組、E組組明顯升高(p

12、8±0.14μmol/L,B 組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注6h肺組織NO活性分別為0.49±0.19 μmol/L、0.54±0.15 μmol/L、0.60±0.14μmol/L,E 組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注6h肺組織NO活性分別為0.74±0.17μmol/L、0.70±0.09μmol/L、0.88±0.17μmol/L。B組、C組、D組、E組不同時間點NO活性與A組比較明顯降低(p<0.05),B組不

13、同時間點NO活性比C組、D組、E組組降低更明顯(p0.0

14、5)。結論：1.烏司他丁組與維拉帕米組聯(lián)合治療組的MDA含量、MPO活性比B組、C組、D組降低,SOD活性、NO活性比B組、C組、D組顯著增高,起到保護肺組織的作用。進一步證實了MDA含量 、MPO活性增高、SOD活性、NO活性的水平降低與肺缺血再灌注損傷有關。2.在肺缺血再灌注損傷前聯(lián)合應用烏司他丁和維拉帕米能保護大鼠肺分泌PS的功能從而減輕肺損傷。3.單獨使用烏司他丁、維拉帕米與缺血再灌注組相比,均可減輕肺組織損傷,對肺臟起一定的保