烏司他丁對腎缺血再灌注繼發(fā)肺損傷的保護作用.pdf

1、目的：腎臟作為一種高灌注器官，對缺血非常敏感，在休克復蘇、腎移植和擠壓綜合征等病理狀態(tài)下容易發(fā)生缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)。IRI不僅引起腎臟損傷，也可導致遠隔器官的損傷，甚至多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS），尤其以肺損傷引起的急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndro

2、me，ARDS)最為突出。烏司他丁(Ulinastatin，UTI)是從人體尿液中分離純化出的一種典型的Kuniz型蛋白酶抑制劑，無免疫原性，主要通過抑制炎性介質(zhì)的過度釋放、穩(wěn)定溶酶體膜改善微循環(huán)和凝血功能，減少缺血組織的再灌注損傷。UTI廣泛應用于休克，急性胰腺炎的治療，具有明顯的臟器保護功能。本實驗通過建立大鼠腎缺血再灌注模型，觀察烏司他丁對腎缺血再灌注損傷后遠隔器官肺的保護作用，探討其對腎缺血再灌注肺損傷的保護作用及其機制：觀察分

3、析烏司他丁對腎缺血再灌注損傷后肺保護作用的可行性，為臨床實踐提供有效的實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 健康清潔級Wistar大鼠30只，雄性，月齡3～4月，體重250～300克（河北醫(yī)科大學試驗動物中心提供編號：1007048）。隨機分為三組，每組10只：假手術組（S組），缺血再灌注組（I/R組），烏司他丁給藥組(UTI組)。
　　 Wistar大鼠禁食12小時，自由飲水。腹腔注射3％的戊巴比妥鈉40mg/kg麻

4、醉后，將其仰臥位固定于手術臺上，減去腹部毛發(fā)，用碘伏消毒術野三遍，鋪無菌洞巾。經(jīng)腹正中切口入腹腔，游離腎組織，采用夾閉雙側(cè)腎蒂45min，再灌注24h制備腎缺血再灌注模型。用無創(chuàng)動脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂（腎顏色迅速由紅潤轉(zhuǎn)為蒼白、細動脈搏動消失證明動脈夾閉確切），45min后經(jīng)原切口進腹，松開動脈夾，恢復血供。S組僅行開腹，游離雙腎，腎蒂不夾閉，傷口由生理鹽水紗布覆蓋，暴露45min后縫合切口。I/R組暴露腎臟后夾閉雙側(cè)腎蒂45min后開放動

5、脈夾，再灌注24h。UTI組在夾閉腎蒂前5min靜脈注射烏司他丁5ku/kg，余同I/R組。
　　 所有動物均于再灌注24h后開胸，心臟抽血，處死大鼠。收集血液標本測定肌酐(creatinine，Cr)和尿素氮(urea nitrogen，BUN)。用比色法測定左肺組織丙二醛(malondidehyde，MDA)含量，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性，髓過氧化物酶(myeloperoxida

6、se，MPO)含量。取右肺上葉透射電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)的變化，光鏡下觀察肺組織病理變化?？焖俜蛛x右肺中葉測肺干濕比。用酶聯(lián)免疫法測定大鼠右肺下葉的中TNF-α的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.術后一般情況的觀察：I/R組大鼠病態(tài)明顯，蜷縮，不活動，飲水減少，不再合群取暖，呼吸急促，有分泌物從鼻腔溢出，眼角出現(xiàn)滲出物等。剖腹可見膿血性渾濁滲液。S組大鼠麻醉清醒后活動基本正常。UTI組大鼠術后表現(xiàn)較I/R輕。
　　 2

7、.腎功能結(jié)果
　　 I/R組血清中BUN、Cr的含量較S組明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05）；UTI組血清中的BUN、Cr的含量較I/R組降低，差異具有顯著性（P＜0.05）
　　 3.光鏡下觀察肺組織的病理變化S組肺泡間隔均勻一致，可見少量炎性細胞，肺泡結(jié)構(gòu)基本完整，肺泡腔清晰（見Fig.1.2）；I/R組肺泡間隔明顯斷裂發(fā)生病理性融合，肺泡形態(tài)紊亂，可見大量炎性細胞浸潤及紅細胞滲出（見Fig.3，4）；UTI組

8、肺泡的病理改變較I/R組明顯減輕，肺泡間隔基本完整，可見少量炎性細胞浸潤，肺泡結(jié)構(gòu)較清晰（見Fig.5，6）。
　　 4.電子顯微鏡下觀察肺組織的超微結(jié)構(gòu)變化S組毛細血管基底膜及內(nèi)皮細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肺泡Ⅱ型上皮細胞呈圓形或橢圓形，胞漿豐富。板層小體結(jié)構(gòu)完整，呈圓形，有包膜，內(nèi)見電子密度較高并呈同心圓排列的層狀結(jié)構(gòu)；(見Fig.7，8)；I/R組(見Fig.9，10)基底膜缺失、疏松、不清楚。Ⅰ型上皮細胞嚴重水腫，Ⅱ型肺泡細胞微

9、絨毛數(shù)量顯著減少，線粒體脊斷裂或是融合消失。UTI組(見Fig.11，12)肺微血管內(nèi)皮細胞形態(tài)基本正常，氣血屏障稍增厚，肺泡Ⅱ型上皮細胞板層小體及微絨毛數(shù)量減少，線粒體損傷較輕。
　　 5.肺組織濕/干比I/R組肺組織濕干比明顯高于S組（P＜0.05），UTI組肺組織濕干比明顯低于I/R組（P＜0.05）。
　　 6.酶聯(lián)免疫組化法測定大鼠肺組織中TNF-α的含量與S組比較，I/R組肺組織中TNF-α的含量明顯增高（P

10、＜0.05）；與I/R組比較，UTI組肺組織中TNF-α的含量明顯減少(P＜0.05)。
　　 7.肺組織MDA含量、SOD活性和MPO的含量變化。
　　 與S組相比，I/R組、UTI組肺組織MDA含量，MPO含量升高，SOD活性降低。（P＜0.05）
　　 與I/R組相比，UTI組的MDA含量，MPO含量降低，SOD的活性升高。(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：烏司他丁對大鼠腎缺血再灌注造成的肺損傷有較好