PBMC中CD69、CD107a表達上調(diào)在診斷遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)中的意義.pdf

1、隨著大量新的合成藥物出現(xiàn)，加之藥物的使用日益廣泛，在我國又有中成藥和中藥注射劑的出現(xiàn)，藥物不良反應(yīng)(adverse drug reactions，ADRs)的發(fā)生率顯著增高。藥物不良反應(yīng)主要包括藥物的過量反應(yīng)、副作用、藥物間的相互作用、不耐受、特異質(zhì)、假變態(tài)反應(yīng)、藥物變態(tài)反應(yīng)等。藥物變態(tài)反應(yīng)(drug hypersensitivity，DH)是藥物不良反應(yīng)的重要內(nèi)容之一，其發(fā)病率大約占所有藥物不良反應(yīng)的15%，其中遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)(d

2、elayed-type drug hypersensitivity，DTH)最為常見，包括發(fā)疹型藥疹(exanthematous eruption)、急性泛發(fā)性發(fā)疹性膿皰病(acute generalized exanthematouspustulosis，AGEP)、固定型藥疹(fixed drug eruption，F(xiàn)DE)、中毒性表皮壞死松解癥(toxicepidermal necrolysis，TEN)、斑丘疹型藥疹(macul

3、opapular exanthema，MPE)、重癥多形紅斑(Steven-Johnson syndrome，SJS)、藥物超敏反應(yīng)綜合征(drug-induced hypersensitivitysyndrome，DIHS)或稱伴嗜酸性細胞增多和系統(tǒng)癥狀的藥物反應(yīng)(drug reaction witheosinophilia and systemic symptoms，DRESS)、系統(tǒng)性接觸性皮炎、濕疹樣皮炎等。
　　 藥物

4、變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生機制復(fù)雜，涉及Ⅰ型(速發(fā)型)、Ⅱ型(細胞毒型)、Ⅲ型(免疫復(fù)合物型)和Ⅳ型(遲發(fā)型)變態(tài)反應(yīng)；臨床表現(xiàn)多樣，往往引起多系統(tǒng)多器官病變，病型變化多端；致病藥物種類繁多，其引發(fā)的反應(yīng)又多種多樣無固定的規(guī)律；病變的組織病理學(xué)改變也無特異性改變；致敏藥物診斷難度很大。診斷方法主要分為激發(fā)試驗、皮膚試驗和體外試驗等三大類，其中前兩種屬體內(nèi)試驗。激發(fā)實驗是診斷藥物變態(tài)反應(yīng)致敏藥物的金標準，但是通常不被患者接受，并且要承擔(dān)很大的風(fēng)險，臨

5、床應(yīng)用受到限制。皮膚試驗包括皮膚點刺試驗、皮內(nèi)試驗和皮膚斑貼試驗，其陽性率不高，易出現(xiàn)假陽性及假陰性，臨床未能廣泛應(yīng)用。體外實驗包括藥物特異性淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(lymphocyte transformation tesr，LTT)、細胞因子檢測、T細胞CD69檢測、細胞毒性試驗，對于患者來說沒有任何風(fēng)險，敏感性和特異性均較高，是診斷藥物變態(tài)反應(yīng)病因診斷的有效方法。
　　 體外試驗是變應(yīng)原檢測的常用方法，臨床多檢測特異性IgE，即

6、Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，而且多數(shù)藥物缺乏相應(yīng)的檢測試劑，對Ⅳ型藥物變態(tài)反應(yīng)檢測還處在空白階段。有研究表明，T細胞在遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，T細胞在其定型、增殖和功能分化的不同階段會表達不同的表面分子，分泌不同的細胞因子，檢測這些物質(zhì)便可以了解T細胞的活化情況。其中藥物特異性T細胞表面分子CD69、CD107a具有較高的特異性及敏感性。我們采集20例藥疹患者和10例健康對照者的外周血，檢測其外周血單個核細胞中CD69和CD107a的表達，評

7、價其與遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)的相關(guān)性。
　　 主要方法：
　　 收集20例2010年5月至2011年4月20例藥疹患者，包括發(fā)疹型藥疹、固定型藥疹、急性泛發(fā)性發(fā)疹性膿皰病、重癥多形紅斑等各型藥疹。同時收集10例健康對照者的外周血。采集藥物變態(tài)反應(yīng)患者及對照組每例20ml新鮮外周血，立即用淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞，用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度為2×106/ml，置入24孔板，給予致敏藥物刺激

8、，37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)72h；72 h后經(jīng)Anti-CD107a-PE、Anti-CD69-FITC雙色免疫熒光染色，流式細胞術(shù)檢測外周血單個核細胞中CD69和CD107a分子的表達，采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析比較組間差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、20例藥物變態(tài)反應(yīng)患者，抗生素過敏17例，非甾體類抗炎過敏者2例，卡馬西平致敏1例，本實驗顯示常見致敏藥物為抗生素類和解熱鎮(zhèn)痛藥；固定型藥疹7例，發(fā)疹型藥

9、疹3例，多形紅斑型藥疹2例，斑丘疹型藥疹4例(其中1例伴發(fā)呼吸困難，1例伴發(fā)呼吸困難、心悸、大汗淋漓)，急性泛發(fā)性發(fā)疹性膿皰病2例，重癥多形紅斑(SJS)1例，剝脫性皮炎1例，較常見藥物變態(tài)反應(yīng)類型為固定型藥疹、斑丘疹型藥疹、發(fā)疹型藥疹。
　　 2、健康對照組外周血單個核細胞中CD107a+、CD69+、CD107a+與CD69+細胞刺激前的比例分別為(0.41±0.18)%、(0.33±0.13)%、(0.12±0.06)%，

10、經(jīng)致敏藥物刺激后分別為(0.38±0.28)%、(0.35±0.12)%、(0.14±0.08)%，刺激前后無明顯差異(P>0.05)。
　　 3、藥物變態(tài)反應(yīng)患者外周血單個核細胞中CD107a+、CD69+、CD107a+與CD69+細胞刺激前的比例分別為(0.45±0.25)%、(0.31±0.12)%、(0.15±0.07)%，與健康對照組無明顯差異，但經(jīng)致敏藥物刺激后外周血單個核細胞中CD69+、CD107a+、CD10

11、7a+與CD69+細胞表達比例明顯增高[分別為(9.01±2.91)%、(1.78±0.76)%、(0.74±0.19)%]，和健康對照組、藥疹未刺激組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。
　　 4、在藥疹患者中，我們選取對頭孢克肟與磺胺甲噁唑過敏的患者進行致敏藥物刺激外周血PBMC，72小時后檢測CD107a、CD69的表達情況。發(fā)現(xiàn)藥疹患者外周血PBMC經(jīng)相應(yīng)的致敏藥物刺激后，CD107a、CD69的表達明顯上調(diào)，CD107