β-連環(huán)蛋白對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和其在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的調(diào)控.pdf

1、我們?cè)谘芯恐型ㄟ^(guò)構(gòu)建β-連環(huán)蛋白的反義真核表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染肝癌SMMC-7721細(xì)胞,篩選到一株低表達(dá)β-連環(huán)蛋白的7721細(xì)胞株.腫瘤細(xì)胞的形態(tài),功能,代謝,免疫和行為特點(diǎn)共同組成了細(xì)胞異常分化的可測(cè)指標(biāo),是細(xì)胞間變的表現(xiàn),也是細(xì)胞基因型向表型轉(zhuǎn)變后的顯示,反映了腫瘤這一特殊類型的病理增生與一般增 生的區(qū)別.我們發(fā)現(xiàn)降低肝癌SMMC-7721細(xì)胞中的β-連環(huán)蛋白細(xì)胞的惡性表型受到明顯抑制,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,細(xì)胞體積變大,胞體細(xì)小,胞漿

2、顆粒多,分裂相少,細(xì)胞集堆生長(zhǎng)有明顯抑制,向未轉(zhuǎn)化方向變化,細(xì)胞周期中S期下降,G<,1>期升高;細(xì)胞增殖速度受到顯著抑制.受到達(dá)β-連環(huán)蛋白-TCF/LEF轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物作用的癌基因c-myc的基因表達(dá)明顯降低.我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)在肝癌SMMC-7721細(xì)胞中,伴隨P13K信號(hào)途徑中PKB的活化或抑制.胞漿中游離的β-catenin的含量可升高或降低,而且胞內(nèi)β-catenin的蛋白含量的變化與基因表達(dá)無(wú)關(guān),提示PKB很可能是參與了調(diào)控

3、β-catenin的降解機(jī)制.即通過(guò)PKB調(diào)節(jié)GSK-3β的磷酸化,進(jìn)一步調(diào)控后者與axin、APC形成的β-catenin降解復(fù)合物.參與β-catenin的調(diào)節(jié).我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可以明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖,隨后又分別用流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡.從生化和形態(tài)兩方面證實(shí)了白藜芒醇可以誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞發(fā)生凋亡,進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),用白藜蘆醇以不同濃度及不同的時(shí)間處理SMMC-7721細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)PKB及β-cat