懷牛膝的抗炎活性評價和毒理學(xué)檢驗.pdf

1、牛膝(AchyranthesbidentataBlume.)為石竹目莧科牛膝屬多年生草本植物，是我國常用的大宗中藥材之一。中醫(yī)學(xué)上牛膝歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，活血通經(jīng)，引火下行，利尿通淋等功效。多用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、閉經(jīng)、產(chǎn)后淤阻腹痛、跌打損傷及腰膝酸痛、下肢無力、尿血、小便不利、尿道澀痛等癥，為臨床常用中藥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明牛膝還具有抗衰老、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛消炎、提高機(jī)體免疫力等多種功效。
　　 牛膝入藥往往只使用其干燥

2、的根，大量的藥理、臨床研究都集中在其根部，地上部分如種子、葉子等的研究并不是很多，且多數(shù)都只停留在對其營養(yǎng)成分的分析方面。在揚(yáng)州民間，常常用牛膝地上部分泡茶飲，用以緩解咽部不適，效果較佳?？疾旃偶c現(xiàn)代臨床資料我們也找到了類似的醫(yī)案，只是相關(guān)可供參考的科學(xué)理論依據(jù)并不是很多。
　　 本課題以懷牛膝（牛膝在傳統(tǒng)中藥藥材質(zhì)量中，以河南懷慶府所產(chǎn)的“懷牛膝”質(zhì)量最好）地上部分為主要原料，對其清咽功能進(jìn)行研究，具體研究內(nèi)容包括:

3、　　 1.懷牛膝地上部分抗炎活性的檢測
　　 參考《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003)中“清咽功能”的評價方法，選擇大鼠足趾腫脹試驗來檢驗懷牛膝粗提物和正丁醇有機(jī)相的抗炎活性。結(jié)果表明，正丁醇萃取部位的抗炎活性能力最強(qiáng)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析與空白組比較顯著性差異明顯。其有效劑量為750mg/kg。
　　 2.抗炎活性部位的定性、定量及抗炎活性能力研究
　　 采用顯色反應(yīng)如Libermann反應(yīng)、Molish反應(yīng)等

4、和泡沫反應(yīng)試驗對抗炎活性部位進(jìn)行定性研究，結(jié)果表明抗炎活性物質(zhì)為酸性皂苷類化合物。
　　 抗炎活性物質(zhì)的定量研究，以齊墩果酸為對照品，利用HPLC法對活性物質(zhì)進(jìn)行分析，最終確立分析的色譜條件為:色譜柱Zorbax300SB-Cl8(4.6mm×150mm，5um)，最佳流動相為甲醇∶水=88:12，流速:1.0ml/min，柱溫:35℃，進(jìn)樣量:10μl。經(jīng)計算，樣品中齊墩果酸的含量為1.2％。從而確定懷牛膝地上部分原料中具有清

5、咽功能的主要活性物質(zhì)為五環(huán)三萜皂苷，皂苷元為齊墩果酸。
　　 以大鼠足趾腫脹實驗對懷牛膝皂苷的抗炎活性規(guī)律進(jìn)行研究，共設(shè)5個組別，分別為空白對照組、陽性對照組和3個受試樣品劑量組。各組分別按1ml/100g灌胃量給藥。第一組為空白對照組灌胃給予10ml/kg蒸餾水，第二組為陽性對照組灌胃給予50mg/kg阿司匹林，第三組為懷牛膝總皂苷小劑量組，灌胃給予400mg/kg的受試物，第四組為懷牛膝總皂苷中劑量組，灌胃給予800mgkg

6、的受試物，第五組為懷牛膝總皂苷高劑量組，灌胃給予1200mg/kg的受試物。每日清晨空腹灌胃，晚間禁食12h，不控制飲水，連續(xù)給藥30天。結(jié)果表明，中劑量組800mg/kg和高劑量組1200mg/kg灌胃給藥30天后給予致炎劑，分別在1小時、3小時、5小時、7小時時足趾厚度的差值與對空白照組相比差異顯著，經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件分析，p＜0.01或p＜0.05，表明該濃度的受試樣品對試驗動物具有清咽功能，且抗炎功效可維持7小時之久。小劑量組即

7、每公斤體重給藥400mg組沒有表現(xiàn)出抗炎消腫的功能，SPSS統(tǒng)計分析的p＞0.05。
　　 3.毒理學(xué)檢驗
　　 從急性毒理和30喂養(yǎng)試驗兩方面對牛膝總皂苷進(jìn)行毒理學(xué)檢驗。
　　 急性毒性試驗，選用清潔級Wistar大鼠12只，雌雄性別各半，適應(yīng)喂養(yǎng)7天后用于實驗。按外來化學(xué)物急性毒性分級中微毒(5000mg/kg)劑量灌胃給予大白鼠。連續(xù)觀察14天，觀察實驗大白鼠的各種性狀，并記錄中毒癥狀和死亡情況。通過14天

8、喂養(yǎng)實驗后觀察，12只大鼠（雌雄各半）飲食、活動糞便情況正常，生長發(fā)育良好，無一只出現(xiàn)明顯中毒癥狀，也無一只死亡，基本證明懷牛膝抗炎活性部位安全性很高。
　　 通過30天的喂養(yǎng)實驗后觀察，大鼠飲食、活動糞便情況正常，生長發(fā)育良好，無一只死亡。大鼠的肝、血液循環(huán)系統(tǒng)、腸胃系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、造血或凝血系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、眼、呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、皮膚和肌肉的一般檢查均無異常反應(yīng)出現(xiàn)，基本證明懷牛膝總皂苷無毒