核酶和RNA干擾技術在腫瘤及移植免疫中的作用研究.pdf

1、第一部分調(diào)控FAS表達的錘頭狀核酶在腫瘤免疫和移植免疫中的作用研究;移植后復發(fā)仍是對許多血液病人施行異基因骨髓移植的主要障礙之一.近年來的臨床移植實踐證實供者淋巴細胞輸注(DLI)進行過繼性免疫治療在誘導GVL作用,鞏固供者型嵌合體,治療異體造血干細胞移植(Allo-HSCT)后復發(fā),以及移植后病毒感染等方面取得了可喜效果.更有研究表明,Allo-HSCT根治白血病不僅是移植前預處理的結果,移植后供者淋巴細胞的GVL起著根本性功效.體內(nèi)

2、外實驗證實供者T淋巴細胞(包括CD4<'+>和CD8<'+>細胞)在DLI后誘導的GVL效用中起重要作用,CD4<'+>T細胞在抗原提呈細胞(APC)的參與下,識別白血病細胞編碼的抗原而被活化,進而激活CD8<'+>T細胞使之成為效應性CTL,CTL可識別白血病細胞表面的MHC-Ⅰ類分子-白血病抗原肽復合物,被激活而發(fā)揮GVL作用.活化的T細胞表面Fas及FasL表達均增高,而大量研究表明在體內(nèi)異常微環(huán)境及一系列細胞因子的作用下,白血病

3、細胞表面可高表達FasL,并可通過Fas-FasL途徑誘導Fas<'+>的T細胞凋亡,降低其GVL效應,從而逃逸免疫應答,即所謂白血病細胞的"Fas反擊"作用.從提高DLI誘導的GVL效應的角度出發(fā),該課題構建了針對小鼠Fas的錘頭狀核酶,將其導入小鼠T細胞,觀察該核酶對T細胞凋亡及增殖的影響,探索供者淋巴細胞輸注時提高GVL作用的新途徑.第二部分PLK1基因沉默對K562細胞凋亡及細胞周期的影響研究中文摘要[目的]將設計合成的短發(fā)夾狀

4、RNA(short hairpin RNA,shRNA)導入該課題構建的真核表達載體中,使其在細胞內(nèi)高效轉(zhuǎn)錄,觀察shRNA對K562細胞內(nèi)PLK1的抑制作用,及其對細胞凋亡和細胞周期的影響,探討PLK1在白血病發(fā)病中的作用和RNA干擾技術在人類細胞株中的應用,尋找更為有效的白血病治療途徑.[方法]通過PCR擴增出原核載體-psiRNA-hH1neo上的H1啟動子序列,再將其克隆于增強型綠色熒光蛋白表達載體-pEGFP-C1,形成siR

5、NA的真核表達載體pEGFP-H1.將設計合成的針對PLK1基因1416~1436位點的siRNA序列克隆于pEGFP-H1中命名為pEGFP-H1/PLK1,以高表達PLK1的宮頸癌Hela細胞株為模型,觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后PLK1的表達情況.再通過電穿孔轉(zhuǎn)染法將其導入K562細胞中,分為對照組、pEGFP-H1空載體轉(zhuǎn)染組和pEGFP-H1/PLK1轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后24h,48h,分別通過RT-PCR和western blot檢測各組細胞PL