RNA干擾技術(shù)抑制IGF1R表達(dá)誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞及腫瘤對DDP的增敏作用.pdf

1、目的:評價(jià)RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)對人肺癌A549細(xì)胞系中胰島素樣生長因子1類受體(IGF1R)表達(dá)的阻斷效應(yīng),以及IGF1R基因沉默后腫瘤在細(xì)胞水平和動物水平對化療藥物敏感性的改變及其機(jī)制。方法:應(yīng)用U6啟動子介導(dǎo)DNA模板轉(zhuǎn)錄生成短發(fā)夾樣RNA(siRNA)并轉(zhuǎn)染人肺癌A549細(xì)胞株,經(jīng)RT-PCR和Western blot檢測IGF1R表達(dá)的改變;聯(lián)合應(yīng)用化療藥物順鉑(DDP),通過MTT法,流

2、式細(xì)胞技術(shù)觀察細(xì)胞生長,細(xì)胞周期,細(xì)胞凋亡及DDP半數(shù)致死量(IC50)的變化;建立荷瘤裸鼠肺癌模型,腹腔注射DDP,觀察沉默IGF1R表達(dá)對裸鼠體內(nèi)腫瘤生長情況的影響,并應(yīng)用TUNEL法檢測瘤內(nèi)細(xì)胞凋亡情況;進(jìn)一步分析IGF1R信號通路中Erk和Akt磷酸化程度,探索其可能的作用機(jī)制。結(jié)果:成功構(gòu)建靶向IGF-1R的siRNA表達(dá)載體和對照組表達(dá)載體,分別命名為pIGF1R-siRNA1、pIGF1R-siRNA2和pcontrol-

3、siRNA。pIGF1R-siRNA1和pIGF1R-siRNA2轉(zhuǎn)染組IGF1R mRNA表達(dá)量分別是對照組的(20.1±3.4)％和(77.8±3.9)%,蛋白表達(dá)量分別是對照組的(9.2±2.1)%和(44.9±4.1)%,組間具有顯著性差異(p<0.05)。沉默IGF1R表達(dá)同步伴隨ERK和Akt磷酸化受抑。抑制IGF1R表達(dá)使DDP對腫瘤細(xì)胞24h、48h、72h的IC50均明顯減少,IGF1R-siRNA1組DDP作用72h

4、的IC50為0.92mg/L,明顯低于control-siRNA組的3.77 mg/L,0.5 mg/L DDP聯(lián)合IGF1R-siRNA1作用48h后,A549細(xì)胞的生長抑制率達(dá)32.1%,明顯高于control-siRNA組的18.9%,細(xì)胞凋亡率從27.8%上升致44.2%;腹腔內(nèi)注射DDP能有效抑制裸鼠體內(nèi)腫瘤生長,瘤體重量DDP+control-siRNA組為PBS組的45.8%,DDP+IGF1R-siRNA組為PBS組的1