高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞對T淋巴細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)的抑制作用.pdf

1、背景：近年來惡性腫瘤的發(fā)病率越來越高,嚴(yán)重威脅人類的健康。腫瘤的形成及轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的多階段連續(xù)過程,受多種因素的影響,而腫瘤細(xì)胞能否逃逸免疫系統(tǒng)的監(jiān)視是影響腫瘤形成和發(fā)展的主要原因之一。機(jī)體免疫系統(tǒng)通過免疫監(jiān)視作用識別、控制并最終消滅腫瘤,而腫瘤細(xì)胞可通過不明機(jī)制逃逸免疫系統(tǒng)的監(jiān)視而生存。因此,腫瘤免疫逃逸機(jī)制一直是腫瘤研究的重要內(nèi)容,但是目前沒有重大進(jìn)展。
　　調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells, Treg)具

2、有免疫抑制功能,其介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)作用是維持自身免疫耐受的關(guān)鍵。Treg細(xì)胞可以通過細(xì)胞之間直接接觸,也可以通過分泌免疫抑制因子IL-10及IL-35等發(fā)揮其調(diào)節(jié)功能,如IL-10抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活性,IL-35抑制T細(xì)胞的增殖等,而IL-10及IL-35的表達(dá)則受Foxp3的調(diào)控。近年來的研究發(fā)現(xiàn)Foxp3是Treg細(xì)胞的標(biāo)志性分子,Foxp3是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子,其對目的基因主要發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用,在Treg細(xì)胞的發(fā)育及功能維護(hù)方面起關(guān)鍵

3、作用。
　　由于Treg細(xì)胞在自身免疫調(diào)控中有關(guān)鍵性的作用,人們開始關(guān)注腫瘤細(xì)胞是否通過Treg細(xì)胞抑制免疫功能從而主動逃避免疫監(jiān)視。研究結(jié)果表明,Treg細(xì)胞的確與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。研究者在人結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌等腫瘤組織內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了高比率的Treg細(xì)胞,而且發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌以及前列腺癌中Treg細(xì)胞與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。這些研究結(jié)果說明,可能正是腫瘤組織存在和聚集的Treg細(xì)胞使腫瘤細(xì)胞可以逃避

4、免疫系統(tǒng)的監(jiān)視最終形成腫瘤。
　　最近研究發(fā)現(xiàn),一些高表達(dá)Foxp3的腫瘤細(xì)胞具有類似于Treg細(xì)胞的免疫抑制作用,如人淋巴瘤細(xì)胞及胰腺癌細(xì)胞抑制T細(xì)胞增殖等。我們的初步研究也得到類似的結(jié)果,在一些腫瘤細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞株(PC-3, MDA-MB-231, NCI-H157, NCI-H727等)中都不同程度地表達(dá)Foxp3,以前列腺癌細(xì)胞株(PC-3)及肺癌細(xì)胞株(NCI-H727)表達(dá)水平最高。
　　這些發(fā)現(xiàn)提示我們Fox

5、p3可能賦予腫瘤細(xì)胞主動防御的能力,從而使Foxp3陽性腫瘤細(xì)胞可以主動影響免疫監(jiān)視。因此,本實(shí)驗(yàn)要進(jìn)一步探討Foxp3具體賦予腫瘤細(xì)胞哪些能力和特性,使腫瘤細(xì)胞以何種方式和途徑影響機(jī)體免疫系統(tǒng)從而逃脫免疫監(jiān)視,為腫瘤治療和預(yù)防提供指導(dǎo)策略,同時也有助于抗腫瘤藥物的研發(fā)。
　　目的：研究轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在肺癌細(xì)胞中的高表達(dá)對T淋巴細(xì)胞的免疫抑制作用,為腫瘤治療及藥物開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法建立

6、穩(wěn)定高表達(dá)Foxp3的NCIH-1299肺癌細(xì)胞株,作為高表達(dá)Foxp3的陽性細(xì)胞,同時用pcDNA3空載體轉(zhuǎn)染NCIH-1299細(xì)胞,作為陰性對照。ELISA方法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中IL-8、IL-10等細(xì)胞因子表達(dá)量的變化;檢測T淋巴細(xì)胞和轉(zhuǎn)染細(xì)胞共培養(yǎng)后IL-2表達(dá)量的變化。MTT法評價轉(zhuǎn)染細(xì)胞增殖能力的改變;觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)時T細(xì)胞對轉(zhuǎn)染細(xì)胞增殖的影響;觀察T細(xì)胞對轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞殺傷作用。免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞與T淋

7、巴細(xì)胞的相互作用。建立移植瘤小鼠模型,觀察Foxp3在小鼠成瘤中的作用。
　　結(jié)果：成功建立高表達(dá)Foxp3的NCIH-1299肺癌細(xì)胞株;與陰性對照相比,高表達(dá)Foxp3的細(xì)胞IL-8表達(dá)量減低,IL-10表達(dá)量升高,且與T細(xì)胞共培養(yǎng)時抑制T細(xì)胞IL-2的表達(dá)。MTT法和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測到Foxp3的高表達(dá)抑制T細(xì)胞的增殖和侵潤。利用移植瘤小鼠模型觀察到Foxp3的高表達(dá)促進(jìn)腫瘤形成和腫瘤的生長。
　　結(jié)論：