腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞活化前后FOXP3、Fas-FasL的表達(dá)及意義.pdf

1、目的： 通過激活患者自身免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫，可以增強(qiáng)機(jī)體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長、擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，以達(dá)到清除或控制腫瘤的目的。近幾年研究發(fā)現(xiàn)被腫瘤特異性抗原調(diào)節(jié)T細(xì)胞(Treg)激活的反調(diào)節(jié)效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤治療的作用上有重要的抑制作用。本文旨在檢測腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞的體外增殖活化情況，同時分析其活化前后FOXP3以及Fas/FasL的表達(dá)。為臨床腫瘤患者的免疫治療提供理論基礎(chǔ)。 方法： 本研究在蘇大

2、免疫所自行研制的鼠抗人CD28激發(fā)型單克隆抗體(2F5)的基礎(chǔ)上，采用腹水誘生法及免疫親和層析法進(jìn)行單抗的獲取和純化，F(xiàn)icoll密度梯度離心法獲取腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞。利用CD3單抗聯(lián)合CD28單抗體外活化T淋巴細(xì)胞。MTT法檢測T細(xì)胞的增值效應(yīng)，ELISA法檢測活化T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2、及IL-10的分泌，免疫熒光及流式細(xì)胞術(shù)分析其經(jīng)激發(fā)性CD28單抗聯(lián)合CD3單抗活化前后FOXP3以及Fas/FasL的表達(dá)。

3、結(jié)果： 膜水誘生法獲得了CD28單克隆抗體3.8 mg/ml。MTT實驗結(jié)果表明，72h時，激發(fā)性CD28單抗聯(lián)合抗CD3單抗，可較好促進(jìn)T淋巴細(xì)胞(患者及對照組)的顯著增殖。ELISA檢測結(jié)果顯示，CD3單抗聯(lián)合激發(fā)型CD28單抗作用組中IL-2的分泌含量增高，IL-10的分泌含量降低。經(jīng)免疫熒光及流式細(xì)胞術(shù)對腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞中Treg細(xì)胞的特異性標(biāo)志FOXP3蛋白進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，腫瘤患者外周血中FOXP3蛋白表達(dá)

4、比例為(6.208±2.754)％，對照組為(2.53±0.638)％，而活化后比例為(5.488±3.675)％。對照組為(2.173±1.137)％。同時T淋巴細(xì)胞表面的Fas/FasL的檢測結(jié)果顯示Fas的表達(dá)為(1.467±0.590)％，對照組為(1.122±0.598)％，活化后分別為(3.692±1.822)％、(3.6±0.657)％，而FasL表達(dá)二者分別為(2.89±1.027)％、(2.532±0.967)％，活化