Graves病肝功能損害的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)核酸免疫,建立Graves病動(dòng)物模型.在動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,了解Graves病肝臟損害的病理變化及其發(fā)病機(jī)制,并進(jìn)一步探討Graves病肝功能損害時(shí)小鼠基因群表達(dá)水平上的變化,尋找Graves病肝臟損害相關(guān)基因.方法:選取6~8周齡的雌性BALB-c小鼠60只,分別在0周、第4周、第8周、第12周對(duì)其中45只小鼠進(jìn)行hTSHR-pcDNA免疫,其余15只注射生理鹽水做空白對(duì)照.16周時(shí)處死所有小鼠.分析各時(shí)間點(diǎn)(0周、第4周、第

2、8周、第12周、第16周)小鼠的體重、血清TsAb、TSH、TT<,4>以及ALT值的變化.并在16周時(shí)對(duì)小鼠甲狀腺進(jìn)行稱重、免疫組化分析以及小鼠肝臟組織電鏡觀察.16周時(shí)按照TsAb值把所有實(shí)驗(yàn)小鼠分成三組:Graves病組(免疫小鼠,TsAb升高)、陽(yáng)性對(duì)照組(免疫小鼠,TsAb正常)、空白對(duì)照組(正常小鼠).觀察三組小鼠ALT的變化、肝組織在電鏡下的不同表現(xiàn),以及Graves病小鼠TsAb、TT<,4>和ALT三個(gè)指標(biāo)之間的關(guān)系.

3、將Graves病小鼠按ALT水平分成兩組:對(duì)照組(ALT正常水平)和實(shí)驗(yàn)組(ALT水平升高),從兩組小鼠的肝組織中提取mRNA,逆轉(zhuǎn)錄后分別用Cy5(實(shí)驗(yàn)組)和Cy3(對(duì)照組)熒光標(biāo)記,獲得兩組動(dòng)物來(lái)源的cDNA探針,分別與Biodoor基因表達(dá)譜芯片雜交,結(jié)果用Scan Array4000掃描儀掃描并用GenePix Pro 3.0軟件分析掃描結(jié)果.重復(fù)兩次后,對(duì)表達(dá)水平差異(上調(diào)或下調(diào))顯著的基因進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證.結(jié)論:1、利用