遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練促進(jìn)血管新生及蛋白差異表達(dá)的研究.pdf

1、第一部分缺血訓(xùn)練促進(jìn)血管新生的遠(yuǎn)隔作用 目的：探討骨骼肌缺血訓(xùn)練促進(jìn)缺血心肌和骨骼肌血管新生的遠(yuǎn)隔作用。 方法：1.對冠狀動脈缺血的影響：取健康成年新西蘭兔，冠狀動脈左室支安置氣囊梗阻器，隨機(jī)分為遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練組(RIT)、單純心肌缺血組(MI)、假手術(shù)組(Sham)。RIT和MI組給予4周間斷性心肌缺血刺激，建立可控性心肌缺血模型。RIT組同時應(yīng)用止血帶環(huán)扎雙下肢，給予每日4次，每次10分鐘骨骼肌缺血訓(xùn)練。2.對股動脈缺

2、血的影響：健康成年新西蘭兔，左股動脈安置氣囊梗阻器，隨機(jī)分為單側(cè)遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練組(uRIT)、下肢缺血組(LI)。兩組均給予間斷性左下肢缺血刺激，建立可控性下肢缺血模型。uRIT組同時應(yīng)用止血帶環(huán)扎右下肢，給予右側(cè)骨骼肌缺血訓(xùn)練。刺激4周后，股動脈缺血組做左下肢DSA檢測。之后分別取各組缺血區(qū)心肌(冠脈缺血實(shí)驗(yàn))和左側(cè)內(nèi)收肌(股動脈缺血實(shí)驗(yàn))觀察形態(tài)學(xué)改變；微球技術(shù)檢測缺血區(qū)冠狀動脈和股動脈循環(huán)血流量變化；Ⅷ因子免疫組化判斷毛細(xì)血管密度；

3、Western blot方法檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。 結(jié)果：與MI組相比，RIT組缺血心肌血流量，毛細(xì)血管密度以及VEGF分別增加35％，49％和28％(p<0.01)；局部血流量，毛細(xì)血管密度的增加與VEGF的變化呈正相關(guān)(r=0.74，0.67，p<0.01)；心肌缺血組側(cè)支血流量明顯大于Sham組(p<0.01)。DSA檢測可見，兩組比較，uRIT組股動脈缺血區(qū)側(cè)支血管生成顯著；uRIT組血流量明顯增加。

4、 結(jié)論：遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練促進(jìn)缺血心肌與骨骼肌局部血流量增加和側(cè)支循環(huán)生成。 第二部分遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練促進(jìn)血管新生的蛋白質(zhì)組學(xué)研究 目的：探索遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練促進(jìn)血管新生的缺血心肌差異蛋白表達(dá)，為遠(yuǎn)隔作用提供蛋白質(zhì)組學(xué)證據(jù)和分子生物學(xué)基礎(chǔ)。 方法：健康成年新西蘭兔15只,冠狀動脈左室支安置氣囊梗阻器，隨機(jī)分為遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練組(RIT)、單純心肌缺血組(MI)、假手術(shù)組(Sham)，每組5只。RIT和MI組給予4周可控性心肌缺血刺

5、激，RIT組同時給予遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練。應(yīng)用雙向凝膠電泳分離三組缺血心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)，經(jīng)圖像分析發(fā)現(xiàn)差異點(diǎn)后，運(yùn)用質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果：與MI相比，圖像分析發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練后，RIT組差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)共38個，其中5個差異點(diǎn)同時出現(xiàn)在MI與Sham的比較中。應(yīng)用質(zhì)譜分析鑒定出其中的33個蛋白點(diǎn)，數(shù)據(jù)庫查詢后最終確定蛋白質(zhì)22種，按照功能分別屬于以下四類：(i)與線粒體和能量代謝相關(guān)蛋白(13種)；(ii)細(xì)胞骨架蛋白(2種