FAP-α在小鼠移植瘤中的表達及其誘導表達機制的初步探討.pdf

1、成纖維細胞激活蛋白-α(fibroblast activation protein-α，F(xiàn)AP-α)可選擇性地表達于90％以上的人類肺、乳腺和大腸癌等惡性上皮癌間質(zhì)中的腫瘤成纖維細胞膜上。近年來，F(xiàn)AP-α，作為抗腫瘤基質(zhì)藥物治療研究中的新靶點正受到關(guān)注。 目前，關(guān)于鼠源性腫瘤間質(zhì)中FAP-a表達的文獻報道甚少。本課題擬篩選表達FAP-a的動物腫瘤模型并開展相關(guān)的體內(nèi)外實驗研究。 目的： 本研究通過篩選表達FAP

2、-α的小鼠移植性腫瘤模型，研究FAP-α在腫瘤組織中的表達特點及其誘導表達機制，從而為以FAP-α為靶點的抗腫瘤藥物的研究奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.利用RT-PCR技術(shù)初步篩選表達FAP-α的動物腫瘤模型分別建立小鼠移植性4T1乳腺癌模型和B16黑色素瘤模型，以移植瘤組織的基因組DNA為模板擴增FAP-α基因，從mRNA水平上初步篩選表達FAP-α的動物腫瘤模型。 2.FAP-α在腫瘤組織中表達檢測分別以4T1細胞

3、和4T1腫瘤組織基因組DNA為模板擴增FAP-α基因，在mRNA水平上檢測腫瘤細胞與腫瘤組織表達FAP-α的情況。進一步應用免疫組化技術(shù)檢測4T1腫瘤組織中FAP-α的表達特點。 3.體外誘導FAP-α表達的探索原代培養(yǎng)大鼠成纖維細胞，光鏡下觀察其與4T1形態(tài)學差異。收集腫瘤細胞上清液、腫瘤細胞勻漿、腫瘤細胞膜、腫瘤細胞懸液，分別與成纖維細胞共孵育24h；建立Transwell共培養(yǎng)體系。應用RT-PCR、免疫組化和Wester

4、n Blot技術(shù)檢測上述共培養(yǎng)體系FAP-α誘導表達的情況。 結(jié)果： 1.建立了小鼠4T1乳腺癌模型和B16黑色素瘤模型，應用RT-PCR技術(shù)，初步在mRNA水平上檢測4T1腫瘤組織、B16腫瘤組織表達FAP-a的情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FAP-α在4T1腫瘤組織表達，而在B16腫瘤組織中未見表達；其次分別以4T1乳腺癌細胞系和4T1腫瘤組織總RNA為模板擴增FAP-α基因片段，發(fā)現(xiàn)FAP-α在腫瘤組織中表達而在腫瘤細胞中不表達；

5、最后利用免疫組化技術(shù)在蛋白水平上檢測到在4T1腫瘤組織中，F(xiàn)AP-α表達于腫瘤間質(zhì)中，而在腫瘤細胞中未見表達。 2.原代分離培養(yǎng)大鼠成纖維細胞，建立腫瘤細胞與成纖維細胞體外共培養(yǎng)模型，并通過RT-PCR、免疫組化和Western Blot檢測證實了只有在腫瘤細胞與成纖維細胞直接接觸共培養(yǎng)后，才能誘導后者FAP-α的表達。 結(jié)論： 1.通過基因和蛋白水平的研究證實了小鼠4T1移植瘤組織表達FAP-α，且其表達來源于

6、腫瘤間質(zhì)而非腫瘤細胞，與FAP-α在人體腫瘤中的表達特點相似，為以FAP-α為靶點的抗腫瘤藥物研究提供了理想的動物模型。 2.利用腫瘤細胞與成纖維細胞共培養(yǎng)方法成功地在體外模擬了腫瘤細胞在體內(nèi)生長的微環(huán)境，證實了腫瘤細胞與成纖維細胞接觸是誘導后者表達FAP-α的必要條件。由此，本文推測誘導FAP-α表達是通過細胞表面分子的相互作用所實現(xiàn)，并且在鼠類(小鼠、大鼠)中其誘導分子及誘導機制相似。為進一步探索FAP-α誘導表達機制和開展