MicroRNA 95通過其靶點(diǎn)ST7L激活A(yù)kt-GSK3β-β-catenin通路促進(jìn)HCC增殖和遷移.pdf

1、目的：肝細(xì)胞癌（HCC）是一種威脅人類生命的惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制尚未確定。對(duì)于原發(fā)性肝癌的分子機(jī)制研究目前是國(guó)內(nèi)外的一個(gè)研究熱點(diǎn)，許多 microRNA（miRNA）已被證明在肝癌發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色。我們選取了 miR-95這一microRNA，而且已有許多研究表明，miR-95可以促進(jìn)許多腫瘤生長(zhǎng)，如結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌和非小細(xì)胞肺癌等。本課題在已有研究的基礎(chǔ)上著重研究MicroRNA95在HCC發(fā)生以及發(fā)展

2、中的作用。
　　方法：miRNA高通量測(cè)序技術(shù)及qRT-PCR檢測(cè)miR-95在肝癌組織及正常肝組織中的表達(dá)；CCK8以及克隆形成實(shí)驗(yàn)研究miR-95及ST7L在體外對(duì)HCC增殖的影響；劃痕實(shí)驗(yàn)以及Transwell實(shí)驗(yàn)研究miR-95及ST7L在體外對(duì)HCC遷移的影響；裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)及裸鼠肝癌肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)研究miR-95及ST7L在動(dòng)物體內(nèi)對(duì)HCC增殖及遷移的影響；qRT-PCR實(shí)驗(yàn)研究miR-95/ST7L/Akt/GSK3β/β

3、-catenin信號(hào)軸下游相關(guān)基因mRNA水平的變化；western-blot實(shí)驗(yàn)研究miR-95/ST7L/Akt/GSK3β/β-catenin信號(hào)軸相關(guān)蛋白及其下游相關(guān)蛋白水平的改變；免疫熒光實(shí)驗(yàn)對(duì)ST7L及AKT蛋白進(jìn)行細(xì)胞共定位；免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HCC組織及裸鼠肝癌組織相關(guān)蛋白的水平；雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)研究miR-95對(duì)ST7L基因表達(dá)的調(diào)控；CO-IP實(shí)驗(yàn)研究ST7L與AKT的相互作用；運(yùn)用SPSS對(duì)miR-95的表達(dá)水

4、平與HCC各臨床病理因素的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：組織學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 miR-95在肝癌組織的表達(dá)顯著高于正常肝組織，且miR-95的表達(dá)水平與肝癌的腫瘤大小及腫瘤數(shù)目密切相關(guān)；CCK8和克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示miR-95在體外能夠促進(jìn)HCC的增殖；劃痕實(shí)驗(yàn)以及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR-95在體外能夠促進(jìn)HCC遷移；在動(dòng)物體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)及裸鼠肝癌肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)研究miR-95能夠促進(jìn) HCC增殖及遷移；雙熒光素酶報(bào)

5、告基因?qū)嶒?yàn)顯示ST7L是miR-95的直接作用靶點(diǎn)；免疫組化的結(jié)果提示HCC組織中ST7L蛋白的表達(dá)水平與miR-95的表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)；回復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ST7L在體外及體內(nèi)能夠逆轉(zhuǎn)miR-95引起的HCC增殖；機(jī)制研究的結(jié)果顯示miR-95可以通過其靶點(diǎn)ST7L調(diào)節(jié)Akt/GSK3β/β-catenin信號(hào)通路，并引起Akt/ GSK3β/β-catenin信號(hào)軸相關(guān)蛋白及其下游相關(guān)基因的 mRNA及蛋白水平的改變；免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)

6、現(xiàn) ST7L及 AKT蛋白有相同的細(xì)胞定位；CO-IP實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ST7L能夠與AKT羧基末端相互作用抑制Akt（Ser473）的磷酸化。
　　結(jié)論：研究表明，在人體HCC組織中，miR-95在肝癌組織的表達(dá)顯著高于正常肝組織，且miR-95的表達(dá)水平與肝癌的腫瘤大小及腫瘤數(shù)目密切相關(guān)；生物學(xué)功能研究表明在體外及動(dòng)物體內(nèi)miR-95可以促進(jìn)HCC的增殖及遷移；機(jī)制研究表明，ST7L能夠與AKT羧基末端相互作用從而抑制Akt（Ser