J亞群禽白血病病毒囊膜蛋白與細胞受體結合域鑒定及親合力差異研究.pdf

1、J亞群禽白血病是由J亞群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis virus，ALV-J)引起的腫瘤性傳染病。ALV-J最早發(fā)現于商品肉雞，但近年來在我國蛋雞群和本地雞群中也大規(guī)模流行。該病毒宿主范圍明顯擴大，致病性增強，且囊膜蛋白出現了明顯的變異。gp85蛋白是ALV-J的囊膜表面蛋白，含有病毒-受體決定簇，能夠識別宿主細胞膜上的特異性病毒受體，從而決定亞群特異性及宿主范圍。本研究鑒定了ALV-J gp85蛋白

2、與細胞受體的關鍵結合域，并進一步研究了gp85蛋白序列的差異對其與受體結合的影響及可能的機制。
　　已有多篇文獻報道，A～E亞群ALV的gp85蛋白與相應受體的結合域集中在hr1、hr2區(qū)域。為鑒定ALV-J的gp85蛋白與細胞受體chNHE1的結合域，本研究表達了可溶性的具有生物學活性的ALV-J原型株HPRS-103 gp85蛋白，利用流式細胞術建立了檢測gp85蛋白與受體chNHE1結合能力的方法。采用HA標簽逐段替換gp8

3、5蛋白全序列的策略，共構建了33個嵌合質粒，表達并純化了33種gp85嵌合蛋白。受體結合實驗結果表明，23種嵌合的gp85蛋白喪失了與chNHE1的結合能力。病毒阻斷實驗進一步證實，gp85蛋白與受體chNHE1的結合域集中在第37-283位不連續(xù)的氨基酸序列區(qū)域，不僅限于hr1、hr2區(qū)域。
　　對多株ALV-J的gp85蛋白序列比對發(fā)現，近些年國內流行株的gp85序列與以HPRS-103為代表的肉雞分離株的gp85序列間存在規(guī)

4、律性的氨基酸變異。復制動力學檢測結果表明，國內流行株JL08CH3-1的復制能力明顯高于原型株HPRS-103。受體結合實驗證明，JL08CH3-1的gp85蛋白(JL3-1-gp85)與chNHE1的結合能力高于HPRS-103的gp85蛋白(HPRS-103-gp85)，且二者的受體結合能力差異隨gp85蛋白濃度降低而更加明顯。為探討復制能力和受體結合能力的差異是否與規(guī)律性的氨基酸變異有關，對兩組gp85蛋白氨基酸序列進行比對，發(fā)現

5、在受體結合域內兩組蛋白存在23個氨基酸差異位點。以HPRS-103-gp85為骨架，將該23個差異位點突變成JL3-1-gp85相應的氨基酸。受體結合試驗證明，只有E114-/R117G/N123I三個氨基酸協(xié)同突變的HPRS-103-gp85(HPRS-103-gp85E114-/R117G/N123I)與受體結合能力明顯升高，與JL3-1-gp85的受體結合能力相近。為進一步驗證這一結果，可溶性表達了受體功能域chNHE1的第一個膜

6、外環(huán)(chECL1)，利用表面等離子共振技術檢測不同gp85蛋白與chECL1蛋白的親和力。結果表明，JL3-1-gp85和HPRS-103-gp85E114-/R117G/N123I與受體功能域chECL1的親和力都約為HPRS-103-gp85的2倍，進一步證實，JL3-1-gp85與細胞受體的親和力高于HPRS-103-gp85的受體親和力，且該親和力差異是由gp85序列的114，117和123位氨基酸突變所致。
　　本研究