安徽省2012-2014年J亞群禽白血病病毒的分離及其囊膜蛋白基因序列的分析.pdf

1、J亞群禽白血病(Subgroup J of avian leukosis)是由20世紀(jì)80年代末分離自肉雞的一種由J亞群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J，ALV-J）引起的新的禽白血病的亞群，其臨床上主要造成患病禽類的生長和免疫抑制。近年來，該病在我國的養(yǎng)禽業(yè)普遍流行，給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴(yán)重的危害。
　　應(yīng)用已經(jīng)建立的ALV-J gp85基因特異性PCR檢測方法，對2012至2014年間來自安

2、徽省八個市縣的33只疑似患病雞進(jìn)行PCR檢測，檢出陽性患病雞14只；對安徽省3個雞場患病雞的598份肛門拭子及360份蛋清樣品進(jìn)行ALV p27抗原ELISA檢測，肛門試子及蛋清樣品陽性檢出率分別為33.40％和10.58%；將PCR及ELISA檢測為陽性的樣品接種雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）分離ALV細(xì)胞毒毒株，PCR方法鑒定獲取的ALV毒株，共獲得ALV-J病毒毒株19株；通過PCR擴(kuò)增的方法對分離的ALV-J毒株的囊膜蛋白基因gp85

3、及gp37基因進(jìn)行序列擴(kuò)增及測定，獲得19個gp85基因序列和10個gp37基因序列；在此基礎(chǔ)上，選取GenBank中16個國內(nèi)外不同的ALV-J參考株與分離株分別進(jìn)行g(shù)p85和gp37的基因序列同源性比對、基因進(jìn)化樹的繪制，gp85基因比對結(jié)果表明：19個分離株與16個參考株的同源性在85.3%～98.1%之間，分離株之間的同源性為91.9%～99.9%，分離株與英國原型株HPRS-103的同源性在87.6%～98.6%之間，結(jié)合gp

4、85基因遺傳進(jìn)化樹結(jié)果顯示18個分離株處于一個大的分支，與原型株親緣關(guān)系較近；氨基酸序列比對分析發(fā)現(xiàn)，在氨基酸110＃ aa～120＃ aa，140＃ aa～150＃ aa，188＃aa～193＃aa這3個區(qū)域之間存在不同程度的缺失和變異；對變異程度較大的AH11-05的gp85基因序列分析得知，AH11-05序列在579bp與589bp之間插入了一段序列-GGGAACCTT-，對ALV-J分離株的gp37基因的序列比對結(jié)果整體上與gp