低氧后處理通過HIF-1α-VEGF通路對成年大鼠短暫全腦缺血神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、背景與目的:
　　急性全腦缺血事件在臨床上多見,主要見于心臟驟停、休克等全身血液動力學(xué)變化引起的腦供血不足。多種器官包括大腦短時(shí)間暴露于某種亞致死性劑量的損傷后,機(jī)體會啟動內(nèi)源性的保護(hù)機(jī)制,可減輕后續(xù)發(fā)生的缺血損傷,這一現(xiàn)象稱缺血耐受。預(yù)處理需在缺血前實(shí)施,而臨床上腦缺血事件難于預(yù)測,使其在臨床上的應(yīng)用受到一定的限制。低氧后處理在腦缺血后實(shí)施,為無創(chuàng)干預(yù),在臨床更為可行。我們先前研究顯示低氧后處理可明顯減少大鼠短暫全腦缺血后海馬C

2、A1區(qū)神經(jīng)元的死亡,但作用機(jī)制還不完全清楚。本研究在成年大鼠短暫全腦缺血低氧后處理模型的基礎(chǔ)上研究HIF-1α和VEGF蛋白在大鼠海馬的表達(dá)變化,探討HPC是否通過HIF-1α/VEGF信號傳導(dǎo)通路抑制凋亡,從而對成年大鼠tGCI起神經(jīng)保護(hù)作用的。
　　材料與方法:
　　選取成年雄性Wistar大鼠,體重220～280g。按照Pulsinelli經(jīng)典的四血管閉塞制作全腦缺血模型。大鼠短暫全腦缺血10min后1d給予低氧后處理

3、,即將大鼠放入密閉防潮箱內(nèi)連續(xù)通入8％O2/92%N2混合氣體2h。運(yùn)用尼氏染色、Fluoro-JadeB染色、免疫組化、免疫熒光、Westernblot等方法,分別觀察短暫全腦缺血組、單純低氧組、短暫全腦缺血組+低氧后處理組大鼠海馬區(qū)細(xì)胞形態(tài)改變以及HIF-1α、VEGF、cleavedcaspase-9、cleavedcaspase-3表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　尼氏染色、NenN免疫組化和Fluoro-JadeB染色顯

4、示,與短暫缺血10min再灌注7d組比較,低氧后處理可顯著增加海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)及減少變性神經(jīng)元數(shù)。海馬CA1區(qū)HIF-1α和VEGF的表達(dá)水平在短暫缺血10min再灌注后0h、4h、26h明顯增高(p<0.05),4h達(dá)高峰,cleavedcaspase-3andcaspase-9的表達(dá)水平在短暫缺血10min再灌注后4h、26h、50h明顯增高(p<0.05),50h達(dá)高峰,予低氧后處理后24h,與對應(yīng)的缺血再灌注50h比較,

5、HIF-1α和VEGF的表達(dá)水平升高(p<0.05),cleavedcaspase-3andcleavedcaspase-9的表達(dá)水平降低(p<0.05)。免疫雙標(biāo)結(jié)果顯示,海馬CA3區(qū)各組cleavedcaspase-3andcleavedcaspase-9的表達(dá)無明顯變化。HIF-1α與神經(jīng)細(xì)胞核和胞漿共表達(dá),VEGF與神經(jīng)細(xì)胞核和星形膠質(zhì)細(xì)胞共表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　HIF-1α/VEGF通路參與低氧后處理對成年大鼠短