成年大鼠牙槽骨成骨細(xì)胞對(duì)硝苯地平和卡托普利跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、長(zhǎng)期服用降壓類藥物，對(duì)全身副作用大。選擇合適的劑型和給藥途徑，使藥物達(dá)到治療效果的同時(shí)，減少藥物的毒副作用，已成為廣大患者的迫切需要。近年來(lái)劉洪臣提出了兩種新的給藥途徑設(shè)計(jì)，即人工種植體全身給藥系統(tǒng)和牙根管全身給藥系統(tǒng)。通過(guò)這兩種給藥系統(tǒng)，將治療局部或全身性疾病的藥物經(jīng)牙周膜或牙槽骨吸收達(dá)到全身，達(dá)到治療疾病的目的。此設(shè)計(jì)需要了解牙周各組織，特別是牙槽骨組織對(duì)不同藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)能力。檢索文獻(xiàn)尚未見(jiàn)關(guān)于骨組織細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)降壓類藥物的報(bào)道，因此本實(shí)

2、驗(yàn)作為人工種植牙全身給藥系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)研究的一部分，探討了成骨細(xì)胞對(duì)硝苯地平和卡托普利的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)能力，為人工種植牙全身給藥系統(tǒng)的可行性提供理論依據(jù)。本研究共分兩個(gè)部分： 第一部分、成年大鼠牙槽骨成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)與鑒定 目的：分離培養(yǎng)和鑒定SD成年大鼠牙槽骨來(lái)源的成骨細(xì)胞。 方法：采用酶消化法和植塊法相結(jié)合，分離培養(yǎng)SD大鼠牙槽骨來(lái)源的成骨細(xì)胞，同時(shí)常規(guī)方法誘導(dǎo)培養(yǎng)MC3T3-E1細(xì)胞。通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、堿性磷酸酶染

3、色、Von Kossa染色、茜素紅染色和免疫組化法鑒定成骨細(xì)胞。 結(jié)果：酶消化法和植塊法相結(jié)合，可獲得較高純度和數(shù)量的成骨細(xì)胞。成骨細(xì)胞堿性磷酸酶染色、Von Kossa染色、茜素紅染、骨鈣素免疫組織化學(xué)染色均呈陽(yáng)性著色。 結(jié)論：本試驗(yàn)采取酶消化法和植塊法相結(jié)合，培養(yǎng)的成骨細(xì)胞及MC3T3-E1細(xì)胞具有正常成骨細(xì)胞生物學(xué)特性，可為進(jìn)一步研究提供合適的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。 第二部分、成年大鼠牙槽骨成骨細(xì)胞對(duì)硝苯地平和卡托普利

4、轉(zhuǎn)運(yùn) 目的：研究成年大鼠牙槽骨成骨細(xì)胞對(duì)硝苯地平和卡托普利轉(zhuǎn)運(yùn)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并初步探討藥物濃度和藥物孵育時(shí)間對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量的影響，為人工種植體給藥系統(tǒng)以及牙根管給藥系統(tǒng)的設(shè)計(jì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：將大鼠牙槽骨成骨細(xì)胞及MC3T3-E1細(xì)胞與含有藥物(20ug/ml、100ug/ml的硝苯地平或30ug/ml卡托普利)的磷酸鹽緩沖液(PBS)共同孵育1、3、5、10、15、20min后，收集各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞，用高效液相色譜法測(cè)定細(xì)

5、胞內(nèi)藥物含量，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定細(xì)胞蛋白總量。用細(xì)胞內(nèi)藥物含量與細(xì)胞蛋白的比值作為觀察藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量的檢測(cè)指標(biāo)。 結(jié)果：1硝苯地平可以被成骨細(xì)胞及MC3T3-E1細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)。(1)轉(zhuǎn)運(yùn)量與細(xì)胞種類有關(guān)。濃度相同時(shí)時(shí)，成骨細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)運(yùn)量明顯均大于MC3T3-E1細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)量(P＜0.01)。(2)轉(zhuǎn)運(yùn)量與藥物濃度有關(guān)。藥物濃度增高，轉(zhuǎn)運(yùn)量越大(P＜0.05)。(3)轉(zhuǎn)運(yùn)量與時(shí)間有關(guān)。2在上述給藥濃度和時(shí)間點(diǎn)上，不能測(cè)出卡托

6、普利在成骨細(xì)胞及MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)的含量。 結(jié)論：1大鼠牙槽骨來(lái)源成骨細(xì)胞及MC3T3-E1細(xì)胞可以跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)硝苯地平。轉(zhuǎn)運(yùn)量與藥物濃度、細(xì)胞種類、孵育時(shí)間有關(guān)。從而驗(yàn)證了人工種植牙全身給藥系統(tǒng)的可行性，至于其轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制目前還不十分清楚，有待于進(jìn)一步深入研究。2本實(shí)驗(yàn)條件下不能檢測(cè)出成骨細(xì)胞及MC3T3-E1細(xì)胞對(duì)卡托普利的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，成骨細(xì)胞能否跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)卡托普利還需還需采取其它方法驗(yàn)證。 綜上所述，本實(shí)驗(yàn)采取酶消化法和植