海馬PKMζ在慢性功能性內(nèi)臟痛中樞敏化中的作用.pdf

1、目的：前期研究發(fā)現(xiàn)慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠海馬長時(shí)程增強(qiáng)(long-term potentiation,LTP)顯著增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究蛋白激酶Mζ(protein kinase Mζ，PKMζ)在慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠海馬LTP增強(qiáng)及痛覺中樞敏化中的作用，以期闡明慢性功能性內(nèi)臟痛中樞敏化的發(fā)病機(jī)制，從而為慢性功能性內(nèi)臟痛的藥物治療提供一個(gè)嶄新的方向。
　　方法：新生SD大鼠出生后第3～21d，每天固定時(shí)間給予3h母嬰分離，建立慢性功

2、能性內(nèi)臟痛大鼠模型。①大鼠成年后(8～10W)通過記錄腹外斜肌對(duì)結(jié)直腸擴(kuò)張(20～80mm Hg)的放電幅值評(píng)估大鼠是否出現(xiàn)內(nèi)臟痛覺敏化。選擇內(nèi)臟痛覺敏化的模型大鼠進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)。②記錄慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠離體海馬CA1區(qū)場(chǎng)電位，觀察模型大鼠海馬LTP與正常大鼠相比是否發(fā)生增強(qiáng)。③在人工腦脊液灌流液中加入0.1、0.5、2.5μMZIP（PKMζ選擇性抑制劑），觀察不同濃度ZIP對(duì)慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠海馬場(chǎng)電位LTP誘導(dǎo)及維持的作用。④采

3、用Western blot方法檢測(cè)正常大鼠與慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠海馬PKMζ及磷酸化PKMζ蛋白的表達(dá)情況。⑤在正常大鼠與慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠行腦立體定位插管術(shù)，雙側(cè)海馬微量注射1.0、2.5、5.0nMZIP，各2μl，觀察ZIP對(duì)慢性功能性內(nèi)臟痛的作用及其藥效時(shí)間。⑥通過曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察海馬注射5.0nMZIP對(duì)慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠運(yùn)動(dòng)及學(xué)習(xí)記憶功能的影響。
　　結(jié)果：①慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟痛敏反應(yīng)顯著高于正常大鼠

4、（p<0.05）。②慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠，高頻刺激誘導(dǎo)的海馬LTP與正常大鼠相比顯著增強(qiáng)（p<0.05）。③PKMζ選擇性抑制劑ZIP（0.1～2.5μM）可劑量依賴性抑制慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠離體海馬LTP的維持（p<0.05），對(duì)LTP誘導(dǎo)無顯著抑制作用（p>0.05）。④慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠與正常大鼠的PKMζ表達(dá)水平無顯著性差異（p>0.05），但磷酸化PKMζ表達(dá)水平顯著高于正常大鼠（p<0.05）。⑤雙側(cè)海馬內(nèi)微量注射ZIP（

5、1.0～5.0nM）可劑量依賴性抑制慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟痛敏行為（p<0.05），且鎮(zhèn)痛效果在注藥后30min達(dá)到最大，鎮(zhèn)痛作用可維持1.5-2h。⑥曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ZIP對(duì)慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠運(yùn)動(dòng)功能無顯著影響（p>0.05），水迷宮結(jié)果顯示ZIP對(duì)慢性功能性內(nèi)臟痛大鼠學(xué)習(xí)記憶功能無顯著影響（p>0.05），提示ZIP的鎮(zhèn)痛作用具有選擇性，無明顯的毒副作用。
　　結(jié)論：新生期母嬰分離可導(dǎo)致幼鼠成年后出現(xiàn)內(nèi)臟痛覺敏化，海馬長時(shí)