HIF-1a蛋白在急性白血病中的表達及其與p-AKT的相關(guān)性.pdf

1、背景與目的：急性白血病是常見的造血系統(tǒng)腫瘤,其本質(zhì)是造血干細胞的惡性克隆性疾病,特征為原始或幼稚細胞無限增殖,并存在分化障礙、凋亡受阻。在過去的30年,化療和造血干細胞移植在一定程度上改善了白血病患者的預(yù)后。但由于細胞增殖失控、凋亡受抑的持續(xù)存在,導(dǎo)致相當?shù)囊徊糠职籽』颊哒T導(dǎo)緩解失敗或者緩解后復(fù)發(fā)。腫瘤細胞增殖迅速導(dǎo)致耗氧量增加而處于缺氧環(huán)境,腫瘤細胞通過增加組織微血管密度(MVD)和改變代謝方式來適應(yīng)缺氧環(huán)境,從而導(dǎo)致腫瘤細胞的惡性

2、增殖和轉(zhuǎn)移,白血病細胞惡性增殖和正常造血受抑使缺氧更加嚴重。缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1(Hypoxia Inducible Factor-1)屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basic-helix-loop-helix,bHLH)轉(zhuǎn)錄因子超家族中的PAS(per-ARNT sim,PAS)亞族蛋白。是調(diào)控腫瘤缺氧效應(yīng)的一類極為重要的轉(zhuǎn)錄因子,被激活后可以調(diào)節(jié)下游多種基因。目前,被確定的基因已有100余種,其中四類目的基因的蛋白產(chǎn)物與腫瘤的關(guān)系密切,

3、包括與血管生成相關(guān)的因子,葡萄糖轉(zhuǎn)運與糖酵解酶,與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的因子與腫瘤增殖和凋亡相關(guān)蛋白。激活下游的靶基因,從而促進腫瘤的生長。p-AKT在多種腫瘤組織中,如卵巢癌、前列腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、胰癌、肺癌及子宮內(nèi)膜癌的組織中都有高表達及活化。AKT被磷酸化為有活性的p-AKT,從而激活PI3K/AKT/mTOR信號路徑。進而誘導(dǎo)和活化HIF-1α,并增加HIF-1α的穩(wěn)定性,調(diào)節(jié)下游的靶基因,參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。HIF-

4、1α在多種實體瘤中的作用已十分明確,而有關(guān)HIF-1α在血液系統(tǒng)疾病中的研究較少。陳震章等人用免疫組化方法檢測急性白血病骨髓中HIF1-α的表達明顯增高。目前有關(guān)HIF-1α在急性白血病中的表達情況及其與PI3K/AKT信號通路之間的關(guān)系尚未見報道。本課題擬應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測HIF-1α、p-AKT蛋白在初治急性白血病骨髓單個核細胞中的表達情況。分析兩者之間的相互關(guān)系以及與患者臨床表現(xiàn)的相關(guān)性,進而探討HIF-1α和p-AKT在急性白血

5、病細胞的增殖和浸潤中的可能作用。
　　材料與方法:病例資料均來自鄭州大學第一附屬醫(yī)院血液科2008年8月至2009年2月住院病人。研究對象分為三組:①初治白血病55例,男35例,女20例,中位年齡37歲(15-74)歲,其中急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)38例,急性淋巴細胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)17例。②急性白血病完全緩解組(AL-CR)23例

6、(AML-CR14例,ALL-CR9例),男13例,女10例。③對照組13名,男7名,女6名,為異基因骨髓移植供者或門診非惡性血液病患者。急性白血病的診斷均符合張之南血液病診斷及療效標準;AML患者給予標準DA(DNR+Ara-C)或TA(THP+Ara-C)方案治療(M3以全反式維甲酸或全反式維甲酸加三氧化二砷方案治療),ALL患者以VDCLP(VCR+DNR+CTX+L-ASP+Prcd)方案治療?；?療程后復(fù)查骨髓象判斷是否完全

7、緩解(CR)。CR的判斷標準參考張之南血液病診斷及療效標準。應(yīng)用流式細胞術(shù)直接免疫熒光標記法檢測細胞膜胞漿蛋白HIF-1α和胞漿蛋白p-AKT的表達,以幼稚細胞群中抗原表達細胞>20％作為陽性。
　　結(jié)果:1.HIF-1α在急性白血病中的表達HIF-1α在初治急性白血病中陽性表達率85.45％,均顯著高于對照組和AL-CR組(P<0.05)。HIF-1α在初治AML中陽性表達率為86.84％,初治ALL中陽性表達率為82.35％,

8、均顯著高于對照組(P<0.05)。初治AML和ALL之間比較,AML-CR和ALL-CR之間,AL-CR與對照組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。2.p-AKT在急性白血病中的表達p-AKT在初治組急性白血病組中陽性表達率80.00％,均明顯高于對照組和AL-CR組(P<0.05),p-AKT在初治AML中陽性表達率為76.32％,初治ALL中陽性表達率為88.24％,均顯著高于對照組(P<0.05)。初治AML和ALL之間比較

9、,AML-CR和ALL-CR之間,AL-CR與對照組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。3.HIF-1α與p-AKT的表達關(guān)聯(lián)性分析所有55例AL患者中HIF-1α+/p-AKT+患者41例(74.55％),HIF-1α-/p-AKT-患者5例(9.09％),HIF-1α+/p-AKT-患者6(10.91％)例,HIF-1α-/p-AKT+患者3例(5.45％)。應(yīng)用2×2列聯(lián)表對HIF-1α和p-AKT在所有AML患者中的表達進

10、行關(guān)聯(lián)性分析發(fā)現(xiàn),兩者的表達具有關(guān)聯(lián)性(χ~2=10.568,P=0.001);Pearson列聯(lián)系數(shù)r=0.438(P=0.001)。4.HIF-1α和p-AKT表達水平與患者性別臨床特征無明顯相關(guān)性(P>0.05),HIF-1α與p-AKT在白血病中的表達與髓外浸潤相關(guān)(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.HIF-1α與p-AKT在急性白血病中均呈高表達,無統(tǒng)計學差異。提示二者的異常高表達可能參與急性白血病的發(fā)生發(fā)展,且與白血病的