鼻咽癌差異表達microRNAs篩選研究.pdf

1、鼻咽癌是我國華南地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一，流行病學(xué)調(diào)查和病因?qū)W研究顯示，其發(fā)病與環(huán)境、遺傳、EB病毒感染等因素的作用密切相關(guān)，但具體的分子機制尚不清楚。 MicroRNA(miRNA)是一類長約19nt～23nt的單鏈非編碼RNA，廣泛存在于植物及動物中，具有物種及組織特異性，進化上高度保守。miRNA可與其靶mRNA的3’非翻譯區(qū)(3’untranslated regions，3’-UTRs)特異性結(jié)合，引起靶mRNA的翻譯抑

2、制或降解，在細胞的生長、分化及死亡過程中發(fā)揮癌基因或抑癌基因的作用。本研究擬應(yīng)用miRNAs芯片篩選原代培養(yǎng)的鼻咽癌細胞差異表達miRNAs，并尋找差異表達miRNAs調(diào)控的靶基因，為進一步研究其在鼻咽癌發(fā)病機制中的作用打下基礎(chǔ)。 材料和方法 取原代培養(yǎng)的鼻咽癌細胞和正常鼻咽上皮細胞，Trizol法抽提總RNA并分離出miRNA；將Cy3熒光標(biāo)記的miRNA進行miRNA芯片雜交反應(yīng)：采集芯片原始信號值并將圖像信號轉(zhuǎn)化為

3、數(shù)字信號，導(dǎo)入Cluster 3.0進行聚類分析和SAM篩選差異表達miRNAs；應(yīng)用定量RT-PCR方法驗證miRNA芯片結(jié)果的可靠性。運用靶基因預(yù)測軟件并結(jié)合全基因組表達譜芯片結(jié)果預(yù)測差異表達miRNAs可能調(diào)控的靶基因，并對靶基因進行Western blot驗證。結(jié)果miRNAs芯片結(jié)果顯示，鼻咽細胞中有存在一些高表達的miRNA，這些miRNA包括let-7家族，miR-21，miR-23，miR-24，miR-29a等；相對于

4、正常鼻咽粘膜上皮細胞，鼻咽癌中miR-203、miR-503、miR-424、miR-141和miR-148a表達下調(diào)，而miR-25、miR-195和miR-15a表達上調(diào)，其差異表達均在2倍以上；熒光定量PCR結(jié)果與miRNAs芯片的結(jié)果較符合；在鼻咽癌下調(diào)表達的miR-203，其預(yù)測的靶基因為CCNG1和SPARC，Western blot結(jié)果顯示，其在原代培養(yǎng)的鼻咽癌細胞亦高表達。 結(jié)論 鼻咽癌細胞中存在差異表達

5、miRNAs，這些miRNA包括miR-203、miR-503、miR-424、miR-141、miR-148a、miR-25、miR-195和miR-15a等，提示這些miRNA可能與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，可作為鼻咽癌的候選標(biāo)記物；應(yīng)用靶點預(yù)測軟件預(yù)測鼻咽癌細胞差異表達miRNA靶基因，發(fā)現(xiàn)它們靶點非常廣泛，涉及到癌基因，細胞周期調(diào)控，細胞分化，轉(zhuǎn)錄調(diào)控，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路基因等；CCNG1和SPARC可能是miR-203調(diào)控的靶基因之一