胰膽管合流異常的臨床和實驗研究.pdf

1、胰膽管合流異常是胰、膽管在十二指腸壁外匯合形成過長通道的先天性異常，十二指腸乳頭部括約肌的作用不能影響整個合流部位，致使膽汁、胰液互流而引起膽胰系統(tǒng)疾病。如果共同通道長度成人≥15mm，小兒≥5mm，便認為是胰膽管合流異常。自1916年kozumi報告此病以來，人們對此進行了大量研究。然而胰膽管合流異常與其相關疾病如胰腺炎、膽石癥、膽管炎、膽道癌、膽總管擴張等疾病的關系仍未明了，并且以往的研究大多限于臨床病例資料及影像資料回顧。為此我們

2、通過胎兒尸體解剖來了解胰膽管合流處的解剖，建立動物實驗模型探討胰膽管合流異常對肝膽胰的損傷，并對胰膽管合流異常動物進行抗氧化治療，為臨床進一步干預提供資料。 一、第一部分:胎兒胰膽管解剖研究 目的：通過胎兒尸體解剖的研究，探討胎兒胰膽管合流的類型及十二指腸乳頭的形狀和位置，了解這一區(qū)域的解剖特點。 方法：選取經(jīng)水囊引產(chǎn)死后6h內(nèi)的新鮮胎兒36例，胎齡4月～9月。切取包括膽囊、膽總管、十二指腸、胰腺的標本，觀察十二

3、指腸乳頭的形狀、位置。再置于福爾馬林中24h，脫水、透明、浸臘、包埋。組織塊以乳頭為中心，橫行連續(xù)切片，厚6μm，每隔5張選一張，作HE染色。顯微鏡下觀察胰膽管合流的類型。 結(jié)果：1）十二指腸大乳頭有半球形21例（58.1%），圓柱形9例（25%），扁平形6例（16.9%）三種形態(tài)。乳頭位于十二指腸降部上1/3部3例（8.3%），中1/3部25例（69.4%），下1/3部7例（19.4%），遠部1例（2.9%）。 2）存

4、在U、V、Y和異常合流四種胰膽管合流方式，其中以Y型24例（66.7%），V型7例（19.4%），U形4例（11.1%），APBDU1例（2.8%）。 結(jié)論：乳頭形態(tài)位置及胰膽管合流的類型變化較多，了解這一解剖在臨床有重要的意義。 二、第二部分:PCNA在膽管上皮細胞的表達 目的：通過先天性膽總管囊腫，膽管癌和流產(chǎn)胎兒膽管三種標本的免疫組織化學染色，探討PCNA在膽管黏膜上皮細胞的表達，了解膽管上皮細胞的增殖分化

5、情況。 方法：取先天性膽總管囊腫標本20例，膽管癌標本8例，流產(chǎn)胎兒膽管標本20例，福爾馬林固定24h。標本常規(guī)石蠟包埋，切片，切片厚度3μm。作PCNA免疫組化染色。 結(jié)果：PCNA陽性染色細胞核為棕色。正常胎兒膽管的表達為5.45%±1.90%，先天性膽總管囊腫的表達為47.75%±5.48%，膽管癌的表達為83.88%±7.24%。三組間的表達不同，有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論：PCNA在三種細胞的表達不同，先天性

6、膽總管囊腫的上皮細胞處于增殖狀態(tài)，PCNA是一種衡量細胞增殖的靈敏指標。 三、第三部分:胰膽管合流異常動物模型的建立 目的：建立更為符合人類胰膽管合流異常特點的動物模型。 方法：選用建康雜種貓15只，3月～1歲，體重3.2～5.0公斤，雌雄不限。術前禁食12h，3.5%戊巴比妥鈉麻醉后，取上腹正中切口切開各層至腹腔。于膽總管進入十二指腸處旁邊，切開胰腺背膜，解剖胰管，靠近十二指腸處分別縱向切開胰管、膽管長約4mm

7、～6mm的切口。6—0線間斷吻合切口，造成類似人類的胰膽管匯合的共同通道。術后20天膽道造影。 結(jié)果：11只貓術后精神、食欲良好，無萎靡、煩燥等表現(xiàn)，造影顯示胰膽管合流共同通道延長。4只于術后3、5天死亡。 結(jié)論：本動物模型更接近于人類的胰膽管合流異常生理解剖，優(yōu)于其他動物模型。 四、第四部分:胰膽管合流異常肝膽胰損傷的實驗研究 目的：建立更為符合人類胰膽管合流異常特點的動物模型后，觀察胰膽管合流異常對肝

8、、膽和胰腺的損傷。 方法：選擇10只健康雜種貓，建立胰膽管合流異常的動物模型，飼養(yǎng)6個月。分別于手術前及6個月后取肝、膽囊和胰腺作HE，電鏡切片，測定組織中MDA，膽汁淀粉酶、PCNA，觀察病理變化。 結(jié)果：7只貓成活，肝膽胰都發(fā)生了明顯變化。 1）肝臟的變化。手術前肝臟呈淡紅色，質(zhì)軟。6月后肝臟顏色加深、呈暗紅色，有粟粒結(jié)節(jié)樣改變，質(zhì)地變韌。光鏡下手術前肝細胞結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，無細胞變性壞死，少量炎性細胞浸潤。6個

9、月后可見大量肝細胞氣球樣變，炎性細胞浸潤。術后6月病理切片的得分高于手術前（9：1），有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。電鏡下術后6個月肝細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴；線粒體腫脹、固縮；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張囊泡化、脫顆粒；有膠原形成。 2）胰腺的變化。手術前胰腺呈粉紅色，表面看不到胰管。6月后胰腺顏色加重，充血、水腫，3例可見擴張的胰管。光鏡下有3例可見炎性細胞浸潤，4例間質(zhì)血管增生、白細胞附壁。電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，有的呈池狀；線粒體數(shù)量增多，體

10、積增大，崩解；高爾基復合體發(fā)達，數(shù)量增多。 3）膽道的變化。6個月后膽管增粗，膽囊壁增厚，囊內(nèi)膽汁稠后。光鏡下手術前黏膜呈指狀，數(shù)目少，無增生；6各月后上皮、黏膜增生及炎細胞浸潤。電鏡下手術前上皮細胞排列緊密、規(guī)則。6月后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張成囊狀，細胞間隙增寬，細胞核變形。淀粉酶、PCNA計數(shù)明顯高于手術前（手術前為192.08±62.04IU，7.29%±2.70%.6個月后為9368.09±2204.42IU，54.71%±10.9

11、0%.P<0.05）。 結(jié)論：胰膽管合流異常時對肝、膽、胰有損傷。 五、第五部分:抗氧化對胰膽管合流異常損傷的實驗研究 目的：對胰膽管合流異常的動物模型進行抗氧化治療，觀察抗氧化治療對胰膽管合流異常肝膽胰損傷的保護作擁。 方法：13只建立胰膽管合流異常動物模型的健康雜種貓，隨機分為兩組：A組7只不抗氧化治療；B組6只給予抗氧化治療（褪黑素1mg/kg/d，腹腔注射，3月后維生素C500mg/kg/d，維生

12、素E500mg/kg/d口服）；一般條件下飼養(yǎng)6個月。觀察肝、膽和胰腺組織的病理變化和MDA含量，手術前13只的作為對照C組。 結(jié)果：建成的13只動物模型均成活6個月，兩組肝膽胰的變化明顯不同。 1）肝臟的變化：C組13只貓的肝臟呈淡紅色，質(zhì)軟，表面無結(jié)節(jié)。A組7只貓的肝臟均顏色加深、呈暗紅色，有粟粒結(jié)節(jié)樣改變，質(zhì)地變韌。B組中有2只與A組貓無差別，另4只肝臟有針尖樣小結(jié)節(jié)，顏色與A組比明顯好轉(zhuǎn)。光鏡下C組肝細胞結(jié)構(gòu)形態(tài)

13、正常，無細胞變性壞死，少量炎性細胞浸潤。A組7只貓可見大量肝細胞氣球樣變，炎性細胞浸潤。B組2只鏡下與A組無差異，另5只氣球樣變細胞數(shù)目明顯減少，沒有壞死。電鏡下B組脂滴數(shù)目，線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張程度都比A組減輕。A組的MDA（4.697±1.957 nmol/mgprot）明顯高于對照組（1.273±0.889nmol/mgprot），而稍高于B組（0.789±0.860 nmol/mgprot），（P=0.001，F(xiàn)=17.43）

14、。 2）胰腺的變化：對照組胰腺呈粉紅色，表面看不到胰管。A組中胰腺顏色加重、不均勻，充血、水腫，3例可見擴張的胰管。B組胰腺顏色稍加重，無胰管擴張及腺體水腫。光鏡下A組中有3例可見炎性細胞浸潤，4例間質(zhì)血管增生、白細胞附壁。B組未見炎性細胞浸潤，2例間質(zhì)血管內(nèi)白細胞增多。電鏡下A組粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，有的呈池狀；線粒體數(shù)量增多，體積增大，崩解；高爾基復合體發(fā)達，數(shù)量增多（圖5—13、14）；B組胰酶分泌減少，較A組減輕。B組MDA（

15、0.927±0.880 nmol/mgprot）低于對照組（1.234±0.716nmol/mgprot）和A組（2.900±1.888 nmol/mgprot）。ANOVA檢驗，P=0.0215，F(xiàn)=4.80。 3）膽道的變化：A組較對照組膽管增粗，膽囊壁增厚，囊內(nèi)膽汁稠后；B組和A組比無明顯變化。光鏡下對照組粘膜呈指狀，數(shù)目少，無增生；A組上皮、黏膜增生及炎細胞浸潤。部分膽管壁纖維組織增生。電鏡下對照組上皮細胞排列緊密、規(guī)則

16、。A組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張成囊狀，細胞間隙增寬，細胞核變形，B組較A組好轉(zhuǎn)。膽汁淀粉酶A組（9368.09±2204.421U），B組（8746.25±2077.951U）。t檢驗，P=0.642>0.05，無統(tǒng)計學意義。PCNA計數(shù)：對照組（7.290±2.706%），A組（54.71%±10.90%）高于B組（48.17%±13.06%）。ANOVA檢驗，P=0.001，F(xiàn)=48.11，有統(tǒng)計學意義（表5—4）。MDA：對照組1.095±0.