中國羅非魚源無乳鏈球菌流行特征及耐藥性研究.pdf

1、羅非魚是中國重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種，在中國南方地區(qū)廣泛養(yǎng)殖，目前已經(jīng)成為中國南方地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖的支柱產(chǎn)業(yè)之一。然而近年來中國羅非魚鏈球菌病連年暴發(fā)，給羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)是羅非魚鏈球菌病的主要病原，傳統(tǒng)的抗生素藥物防控羅非魚鏈球菌病的方法面臨細菌耐藥性、養(yǎng)殖環(huán)境污染和藥物殘留等諸多問題。如何科學的防控羅非魚鏈球菌病的暴發(fā)，成為羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)亟待解決的關鍵問題之一。本研

2、究分離純化了2007-2016年中國南方地區(qū)羅非魚源無乳鏈球菌300株，通過分子生物學方法對其進行分子分型；測定了77株甲醛滅活無乳鏈球菌與WC1535菌株兔抗血清的凝集效價；同時對169株代表菌株進行24種抗生素的藥物敏感性測定，并對代表菌株檢測了10種可能存在的耐藥基因。主要的研究內(nèi)容與結論如下：
　　1.中國羅非魚源無乳鏈球菌分子流行病學研究
　　提取300株羅非魚源無乳鏈球菌基因組DNA，通過PCR方法進行了分子血清

3、型、多位點序列分型(MLST)、前噬菌體基因型分型、菌毛島嶼分型和毒力基因的檢測。結果顯示，300株羅非魚源無乳鏈球菌可以分為3種基因型：Ⅰb-ST-261型、Ⅰa-ST-7-A亞型和Ⅰa-ST-7-B亞型。Ⅰb-ST-261型菌株是Ⅰb血清型，ST型為261型，毒力基因為V2型，不攜帶本研究所檢測的前噬菌體基因，不存在完整的菌毛島嶼，僅在中國南方局部地區(qū)短時間內(nèi)流行。Ⅰa-ST-7型菌株血清型為Ⅰa，ST型為7型，毒力基因為V1型，是

4、中國羅非魚源無乳鏈球菌的主要流行菌株，流行時間長，分布廣泛，該型菌株又可分為兩種亞型：Ia-ST-7-A亞型的前噬菌體基因型為Phage-1，菌毛島嶼為PI-2b型，該亞型菌株主要在2007-2011年流行；Ia-ST7-B亞型的前噬菌體基因型為Phage-2，菌毛島嶼為PI-1+PI-2b型，該亞型菌株在2010年首次出現(xiàn)，2011-2016年成為廣泛流行株型，是Ⅰa-ST-7型無乳鏈球菌中最主要的流行菌株，由此推測中國羅非魚源無乳鏈

5、球菌流行菌株亞型在2010-2011年發(fā)生了遺傳轉變。
　　2.中國羅非魚源無乳鏈球菌血清抗體凝集效價測定
　　本實驗選取了2007-2016年各地區(qū)的羅非魚源無乳鏈球菌代表菌株77株，活化培養(yǎng)后用甲醛處理制成滅活菌體抗原。通過96孔酶標板倍倍稀釋法測定滅活菌體抗原與無乳鏈球菌WC1535菌株兔抗血清的凝集效價。結果顯示：46株羅非魚源無乳鏈球菌滅活菌體與血清抗體的凝集反應測定為陽性，占比59.7％，凝集效價為1：10240

6、；陰性結果菌株31株，占比40.3%，最低血清抗體凝集效價為1：5。2007-2011年88%檢測菌株為陰性，2012-2016年82.6%的檢測菌株為陽性，由此推測中國羅非魚源無乳鏈球菌的優(yōu)勢流行菌株在2011年發(fā)生了轉變。
　　3.中國羅非魚源無乳鏈球菌藥物敏感性測定和耐藥基因檢測
　　本實驗采用藥敏紙片法測定了169株羅非魚源無乳鏈球菌的藥物敏感性，實驗結果顯示，中國羅非魚源無乳鏈球菌對多種藥物具有耐藥性，各流行時間的

7、菌株之間耐藥類型差異不明顯。169株無乳鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物(羅紅霉素、乙酰螺旋霉素)、β-內(nèi)酰胺類藥物(頭孢氨芐、頭孢噻吩、氨芐西林)、林可霉素、四環(huán)素類藥物(四環(huán)素、強力霉素)、氧氟沙星、利福平、氯霉素與氟苯尼考等12種藥物均敏感，敏感率達100%；對氨基糖苷類藥物和磺胺類藥物普遍耐藥，耐藥率大于85%，但是對壯觀霉素的耐藥率較低；對喹諾酮類藥物的耐藥性表現(xiàn)出很大的差異，對氧氟沙星和恩諾沙星的耐藥率為0，對諾氟沙星的耐藥率為14.