冬凌草優(yōu)良細胞株系的篩選和大量培養(yǎng).pdf

1、以田間種植多年生冬凌草為材料，研究了外植體類型、外植體消毒時間、培養(yǎng)基組分、培養(yǎng)條件對冬凌草愈傷組織誘導、繼代及懸浮培養(yǎng)的影響，結果發(fā)現(xiàn)冬凌草的莖為研究的最適外植體，莖的最適消毒時間為3min，MS基本培養(yǎng)基附加2.4—D1.0mg/L、NAA0.5mg/L、6—BA0.1mg/L，30g/L蔗糖為最佳培養(yǎng)基。在50mL固體培養(yǎng)基中接入1g（鮮重）的愈傷組織，置于25～27℃、黑暗條件下培養(yǎng)，繼代6次后，愈傷組織增長倍數(shù)穩(wěn)定，不易褐化、

2、更易于培養(yǎng)。研究了在冬凌草懸浮培養(yǎng)的不同時期添加不同濃度的兩種稀土離子鑭、亞鈰對冬凌草細胞分泌和釋放冬凌草甲素的影響。結果表明，在懸浮培養(yǎng)初期、指數(shù)期、穩(wěn)定期加入稀土元素，不同種類、不同濃度的稀土離子對細胞合成冬凌草甲素影響強弱不同，但均促進了冬凌草甲素的合成。其中，在穩(wěn)定期，加入鑭溶液10×10—4mmol/L的培養(yǎng)液中，獲得的冬凌草甲素含量最高。在培養(yǎng)指數(shù)期添加稀土元素使懸浮培養(yǎng)細胞生長曲線產(chǎn)生較大的變化．整體上使細胞生物量減少。

3、 篩選高產(chǎn)細胞株系，以大幅度提高有用次生代謝產(chǎn)物的含量，是建立植物細胞生物反應器技術中降低成本和提高生產(chǎn)率的重要途徑之一。培養(yǎng)基適宜的pH值、細胞生長年齡與合適的接種方式是細胞團生成成敗的關鍵。本研究主要從接種方式、細胞生長年齡、pH值對細胞團生成的影響進行討論。結果表明，經(jīng)過兩層紗布與一層紗布過濾的濾液，有細胞團生成。條件培養(yǎng)基和看護培養(yǎng)基中細胞團數(shù)較多。處于旺盛分裂期即指數(shù)生長期（懸浮培養(yǎng)12d左右）的冬凌草細胞，細胞團生成數(shù)