黑水虻抗菌肽誘導及粗提物活性研究.pdf

1、目的：采用不同誘導方法對黑水虻(Hermetia illucens L.)幼蟲抗菌肽進行誘導，并對所提取粗提物進行活性研究，探討黑水虻幼蟲抗菌肽粗提物的抑菌活性及生物學活性。期待通過本研究豐富昆蟲抗菌肽的種類，并為黑水虻抗菌肽的研發(fā)及利用提供有效的實驗方法。
　　 方法：本研究利用大腸桿菌菌液針刺浸泡誘導法誘導黑水虻幼蟲，通過研磨提取法提取幼蟲抗菌肽粗提物確定最佳誘導齡期；采用大腸桿菌菌液、金黃色葡萄球菌菌液注射誘導法，大腸桿菌

2、、金黃色葡萄球菌菌液針刺浸泡誘導法，不同功率、不同時間超聲波誘導法對黑水虻5齡幼蟲進行抗菌肽誘導。利用研磨提取法提取抗菌肽粗提物，并對粗提物分別進行抑菌活性研究。選用抑菌效果最佳的抗菌肽粗提物進行生物學活性鑒定及利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)對粗提物進行初步檢測。
　　 結果：研究表明，黑水虻幼蟲產生抗菌肽的最佳誘導齡期為5齡；不同誘導方法產生抗菌肽對大腸桿菌抑菌活性不同，大腸桿菌菌液針刺浸泡60s，誘導后飼養(yǎng)24h提取

3、的抗菌肽抑菌活性最好；其次為超聲波100W誘導20min產生抗菌肽抑菌活性；其余誘導方法產生抗菌肽也有一定的抑菌效果但與未誘導組相比差異不顯著。生物活性研究表明，黑水虻抗菌肽經25℃、37℃、50℃處理10min后仍具有較為理想的抑菌效果；反復凍融次數(shù)少于4次時對抗菌肽抑菌活性無顯著影響，凍融6次以上抑菌活性減小較為明顯：pH值在5.0-9.0范圍仍可保持抑菌活性，pH<5或pH>9的環(huán)境中無明顯抑菌活性。利用反相高效液相色譜(RP-H

4、PLC)得到抗菌肽獨立峰。
　　 結論：1.誘導黑水虻幼蟲產生抗菌肽的最佳齡期為5齡。2.不同誘導方法產生抗菌肽對大腸桿菌抑菌活性不同。大腸桿菌菌液針刺浸泡60s，誘導后飼養(yǎng)24h提取的抗菌肽抑菌活性最好；其次抑菌活性較高的為100W超聲波誘導20min產生抗菌肽。3。黑水虻抗菌肽粗提物在25℃、37℃、50℃時均有較好的活性，低溫反復凍融次數(shù)少于4次時可保持較好抑菌活性；pH值的適宜范圍為5.0-9.0。4.利用反相高效液相色