微生物誘導(dǎo)家蠅幼蟲抗菌肽的研究.pdf

1、昆蟲抗菌肽是昆蟲體液免疫中的一類有生物活性的多肽，具有抗菌譜廣、熱穩(wěn)定和不易產(chǎn)生耐藥性的優(yōu)點(diǎn)，使之有望成為代替抗生素的新型抗菌藥物。家蠅具有很強(qiáng)的抗病能力，存在獨(dú)特的免疫機(jī)制，對(duì)其不同誘導(dǎo)源表達(dá)抗菌肽的類型、活性以及抑菌作用動(dòng)力學(xué)尚未見系統(tǒng)的研究報(bào)道。本課題采用多種外源微生物針刺法誘導(dǎo)家蠅幼蟲表達(dá)抗菌肽，對(duì)微生物誘導(dǎo)產(chǎn)物以及純化抗菌蛋白的物化性質(zhì)和抑菌特性進(jìn)行研究，并對(duì)家蠅抗菌肽的作用機(jī)制進(jìn)行探討。 六種菌分別針刺誘導(dǎo)家蠅幼蟲表

2、達(dá)抗菌肽，通過蛋白表達(dá)量測(cè)定可知不同微生物誘導(dǎo)使產(chǎn)物中蛋白含量增加。利用SephadexG25初步純化后，測(cè)定理化穩(wěn)定性，結(jié)果表明家蠅抗菌肽具有較好的溫度穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性，但活性受離子強(qiáng)度影響較大。通過對(duì)不同誘導(dǎo)產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳以及SDS-PAGE電泳分析表明，不同誘導(dǎo)產(chǎn)物的組分有差別，部分組分分子量較大，帶有較多的正電荷。 通過對(duì)微生物誘導(dǎo)產(chǎn)物的抗菌譜檢測(cè)可知不同微生物誘導(dǎo)產(chǎn)物都具有廣譜抑菌活性，其對(duì)誘導(dǎo)菌的活性較強(qiáng)。志賀

3、氏菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌和鼠傷寒沙門氏菌誘導(dǎo)產(chǎn)物抑菌活性較好。誘導(dǎo)產(chǎn)物對(duì)同一種細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)有差別，MIC都較小?？咕臉悠返幕钚耘c作用時(shí)間有關(guān)，24h內(nèi)出現(xiàn)一到兩個(gè)活性峰，同一抗菌肽樣品對(duì)不同細(xì)菌的抑菌動(dòng)力學(xué)有差異，抗菌肽的抑菌動(dòng)力學(xué)機(jī)制應(yīng)該與它的抑菌作用機(jī)制有關(guān)。 通過抗菌肽樣品對(duì)不同細(xì)菌動(dòng)力學(xué)特性的研究出發(fā)對(duì)抗菌肽抑菌作用機(jī)制進(jìn)行探討。通過電鏡觀測(cè)、細(xì)胞磷代謝、紫外吸收物測(cè)定以及抗菌肽與細(xì)菌DNA相互作用

4、結(jié)果可知，微生物誘導(dǎo)家蠅表達(dá)的抗菌肽樣品不僅能夠造成細(xì)菌細(xì)胞的快速坍塌破裂而且能夠破壞細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，與DNA結(jié)合作用?？咕囊志鷦?dòng)力學(xué)的解釋：微生物誘導(dǎo)產(chǎn)物中含有兩類抗菌肽，一類抗菌肽能造成細(xì)胞膜的快速坍塌破裂形成第一個(gè)活性峰；另一類抗菌肽可進(jìn)入細(xì)胞，破壞細(xì)胞核心，造成紫外吸收物大量外泄形成第二個(gè)活性峰。 利用高效液相色譜分離志賀氏菌誘導(dǎo)產(chǎn)物，得到一條61kDa的抗菌蛋白，將之命名為S1。對(duì)S1的理化穩(wěn)定性以及抑菌特性進(jìn)行研究，