鄰苯二甲酸二乙基己基酯及高氧對新生大鼠肺發(fā)育的影響.pdf

1、目的:
　　1.探討鄰苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)及高氧對新生大鼠肺發(fā)育的影響。
　　2.探討血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血管內(nèi)皮生長因子受體-2（VEGFR-2）內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)是否參與DEHP及高氧影響肺組織發(fā)育的過程。
　　方法:
　　SPF級Sprague-Dawley新生大鼠100只，出生體重5.0-8.0g。隨機分為對照組，DEHP組，O2組，DEHP+O2組，出生后第1天開始每天

2、給對照組及O2組腹腔注射玉米油0.2ml/d，DEHP組DEHP+O2組腹腔注射DEHP（以DEHP750mg/kg/d劑量），并將O2組DEHP+O2組于生后第1天即置于模擬艙中，持續(xù)吸入氧濃度85％±0.03共6天。記錄每組新生鼠每日體重。直至第4天、第7天及第14天處死，取右肺下葉，制作石蠟切片，常規(guī)蘇木素伊紅(HE)染色，光鏡下觀察肺組織結(jié)構(gòu)，進行肺泡計數(shù)分析。免疫組化PV二步法檢測VEGF、eNOS的表達。取右肺上葉小塊新鮮肺

3、組織，用于制作電鏡標(biāo)本，透射電鏡下觀察微血管基底膜，血管內(nèi)皮細胞及肺泡上皮細胞超微結(jié)構(gòu)。取新鮮左肺組織用實時熒光定量PCR（ReaL-time PCR）方法檢測VEGF、VEGFR-2及eNOS的mRNA的表達。
　　結(jié)果:
　　1.各組生長體重比較DEHP+O2組體重增長落后于其他3組，時間越長，落后越明顯;O2組于第7天后體重迅速增長;DEHP組相對于對照組落后不明顯。體重:第4天:各組體重比較無差異（P＞0.05），第

4、7天:DEHP組與對照組比較不明顯(P＞0.05)，O2組、DEHP+O2組均低于對照組(P＜0.01)，DEHP+O2組明顯低于O2組（P＜0.05）。第14天:DEHP組、O2組與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），DEHP+O2組明顯低于對照組(P＜0.01)、DEHP+O2組低于O2組（P＜0.01）。
　　2.肺形態(tài)學(xué)分析
　　a.HE染色:第4天:各組未見明顯病理改變;第7天:對照組未見病理學(xué)改變，DEHP組

5、可見少許肺大泡;O2組及DEHP+O2組可見較多肺大泡，肺泡減少，有出血。第14天:對照組未見明顯病理改變;DEHP組、O2組及DEHP+O2組病理改變較第7天更明顯。
　　b.電鏡觀察:第4天及第14天:各組均未見明顯病理改變;第7天:DEHP+O2組可見肺泡Ⅱ型上皮細胞內(nèi)板層小體部分空泡化;O2組可見血管內(nèi)皮細胞部分線粒體腫脹、空泡化，胞核出現(xiàn)固縮。
　　c.RAC比較:第4、7天:DEHP組與對照組、O2組與DEHP+

6、O2組比較均無差異（P＞0.05），O2組、DEHP+O2組的RAC均小于對照組（P＜0.05）;第14天:DEHP組、O2組、DEHP+O2組的RAC均小于對照組（P＜0.05，P＜0.01）。
　　3.VEGF、eNOS蛋白的表達第4天，與對照組比較，DEHP+O2組VEGF表達減少（P＜0.05），DEHP+O2組及O2組eNOS均表達減少（P＜0.01）;第7天及第14天時DEHP+O2組及O2組VEGF表達及eNOS表達

7、均明顯低于對照組(p＜0.01);且第7天DEHP+O2組VEGF表達明顯低于O2組（P＜0.01）。
　　4.VEGF、VEGFR-2及eNOS的mRNA的表達第4天各組VEGFmRNA及eNOSmRNA表達無差異，O2組及DEHP+O2組的VEGFR-2mRNA表達均低于對照組(P＜0.01，P＜0.05);第7天及第14天時VEGF、VEGFR-2及eNOS的mRNA的表達在DEHP+Q組及O2組均明顯低于對照組（P＜0.0

8、1，P＜0.05）;第14天時DEHP組的VEGFmRNA表達明顯低于對照組（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1.高氧可抑制新生大鼠體重的增長，后期撤離高氧環(huán)境體重可追趕至正常，DEHP可加重高氧對體重增長的影響。
　　2.DEHP及高氧均可抑制肺泡數(shù)的增長，但合用DEHP不加重高氧對肺泡數(shù)目的增長。
　　3.高氧可能通過抑制VEGF蛋白、eNOS蛋白的表達影響肺發(fā)育，而DEHP對肺發(fā)育的影響可能不通過此機制，