BP-,s-新型分析方法的建立及其應(yīng)用.pdf

1、BPs是近20年來(lái)發(fā)展起來(lái)的抗代謝性骨病的一類新藥，臨床上主要用于治療骨質(zhì)疏松癥、變形性骨炎、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起的高鈣血癥和骨痛癥等。
　　 由于BPs具有極性強(qiáng)、易電離、大部分無(wú)生色團(tuán)、不揮發(fā)、生物利用度低等性質(zhì)，給該類藥物的分析帶來(lái)一定的困難。目前，在該類藥物的質(zhì)量控制中仍然采用鉬藍(lán)比色法，該方法是將BPs氧化成正磷酸鹽后，進(jìn)行磷鉬藍(lán)比色，其有關(guān)物質(zhì)（磷酸鹽、亞磷酸鹽）及還原性輔料對(duì)測(cè)定結(jié)果均有影響，專屬性差。雖然已有文獻(xiàn)報(bào)

2、道專屬的HPLC-ELSD方法，但其靈敏度仍然較低，僅適用于該類藥物的原料藥或制劑的分析，不能滿足生物樣品中痕量BPs檢測(cè)的要求。少數(shù)含伯胺基的BPs，如Alen、Pami等，通過(guò)對(duì)其氨基衍生，進(jìn)行色譜分析，提高了靈敏度，能夠滿足痕量生物樣品分析的要求。但這些方法不適合絕大多數(shù)不含衍生基團(tuán)的BPs，且操作繁瑣、費(fèi)時(shí)。
　　 本文課題的目的是建立專屬的、靈敏的BPs分析方法，為該類藥物的質(zhì)量控制提供可靠的、更完善的分析手段。本課題

3、主要從以下兩個(gè)部分進(jìn)行了研究：
　　 第一部分新型OPM的形成及其在藥物分析中的應(yīng)用
　　 一、新型OPM的形成機(jī)理及性質(zhì)的研究
　　 目的：研究新型OPM的形成機(jī)理及其性質(zhì)，如配比、摩爾吸收系數(shù)等。
　　 方法：酸性條件下，BPs與MoO反應(yīng)生成具有較強(qiáng)紫外吸收的OPM；采用紫外分光光度計(jì)掃描，確定最大吸收處波長(zhǎng)；采用Job法和平行移動(dòng)法確定OPM分子結(jié)構(gòu)中BPs和Mo的配比。
　　 結(jié)果：新型

4、OPM較穩(wěn)定；OPM分子結(jié)構(gòu)中BPs和Mo的配比均為1：5，Alen，Pami，Zole，Eti，Inca和Iban與MoO形成的OPM的摩爾吸收系數(shù)分別為8.61×103、9.58×103、6.89×103、7.53×103、8.08×103、8.80×103（L·mol-1·cm-1）。不論BPs分子結(jié)構(gòu)中是否含有氨基，BPs與MoO在酸性條件下反應(yīng)均能形成OPM.
　　 結(jié)論：在酸性條件下，BPs與MoO反應(yīng)生成穩(wěn)定的、強(qiáng)

5、紫外吸收的絡(luò)合物-OPM。OPM分子的中心原子是有機(jī)膦原子。
　　 二、基于新型OPM的分光光度法在BPs制劑分析中應(yīng)用
　　 目的：建立靈敏的、專屬的分光光度法，分析制劑中BPs含量和小劑量伊班膦酸鈉片劑的溶出度。
　　 方法：依據(jù)BPs和MoO在酸性條件下反應(yīng)生成的OPM具有較強(qiáng)紫外吸收的性質(zhì)，采用紫外分光光度法，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。
　　 結(jié)果：OPM較穩(wěn)定，室溫放置24h最大吸收強(qiáng)度沒(méi)有變化；以

6、試劑空白為參比，OPM在254nm處的吸收強(qiáng)度與BPs濃度成良好的線性關(guān)系，Alen、Pami、Zole、Eti、Inca和Iban線性范圍分別為5.00～50.0、4.92～49.2、5.26～52.6、5.00～50.0、5.16～51.6、4.92～49.2μg·ml-1（r≥0.9989），檢測(cè)限分別為0.677、0.916、0.710、0.607、0，810、0.781μg·mL-1，定量限分別為0.203、0.275、0.2

7、13、0.182、0.243、0.234μg·mL-1，平均回收率為96.8～102.6％（n=3），RSD小于1.5％； Iban片劑在8分鐘時(shí)溶出度達(dá)到86％，10分鐘時(shí)基本完全溶出。
　　 結(jié)論：該方法專屬性好、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速，適用于BPs制劑的分析和小劑量Iban片劑溶出度的分析。該方法與傳統(tǒng)的磷鉬藍(lán)比色法相比較，不但不受磷酸鹽、亞磷酸鹽和還原性輔料的干擾，而且簡(jiǎn)便快速，不需要復(fù)雜的樣品預(yù)處理。
　　 第二部

8、分 BPs的色譜分析方法的應(yīng)用研究
　　 一、CE-間接紫外檢測(cè)法測(cè)定Eti和Iban片劑含量
　　 目的：建立簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)的CE-間接紫外檢測(cè)方法，用于Eti和Iban的制劑分析。
　　 方法：以未涂層熔融石英毛細(xì)管柱為分離通道；背景電解質(zhì)為7mmol·L-1苯甲酸鈉溶液；運(yùn)行緩沖溶液為7mmol·L-1磷酸二氫鉀（pH8.0）；分離電壓為20kV；進(jìn)樣電壓為10kV，進(jìn)樣時(shí)間為5s；檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm。

9、
　　 結(jié)果：Eti和Iban在62.60～1002μg·mL-1和61.00～975μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r均大于0.999），檢測(cè)限分別為7.825μg·mL-1和7.744μg·mL-1，平均回收率在99.5％～100.3％之間，RSD小于1.5％（n=3）。
　　 結(jié)論：采用CE-間接紫外分離檢測(cè)Eti和Iban的方法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)，適用于Eti和Iban制劑的常規(guī)分析，為該藥物的質(zhì)量控制提供

10、了一個(gè)新的、專屬的、靈敏的分析方法。
　　 二、離子對(duì)RP-HPLC-ELSD法測(cè)定Iban制劑的含量
　　 目的：建立專屬的、靈敏的分析Iban制劑含量的離子對(duì)RP-HPLC-ELSD方法。
　　 方法：以UltimateTM XB-C18（4.6×250mm，5μm）色譜柱為固定相，流動(dòng)相為20mM三乙胺（用冰醋酸調(diào)pH至8.5）-甲醇-乙腈（90：2：8），流速為1.0ml·L-1，柱溫為室溫，檢測(cè)器為EL

11、SD。
　　 結(jié)果：Iban在30.70～980.0μg·L-1的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為lgA=1.060 lgC+2.047（r=0.999），最低檢測(cè)限為7.675μg·mL-1，平均回收率為98.9～100.5％，RSD小于1.1％。
　　 結(jié)論：本文建立的RP-HPLC-ELSD方法專屬性好、靈敏度高。與文獻(xiàn)報(bào)道的RP-HPLC-ELSD方法相比較，由于采用了分子量小、揮發(fā)性更強(qiáng)的三乙胺作為離子對(duì)試劑

12、，提高了檢測(cè)靈敏度，為Iban的生產(chǎn)及制劑過(guò)程中的質(zhì)量控制提供了可靠的分析手段。
　　 三、在線柱后光化學(xué)反應(yīng)離子對(duì)RP-HPLC-UV法測(cè)定Zole制劑的含量
　　 目的：建立靈敏的、專屬的在線柱后光化學(xué)衍生離子對(duì)RP-HPLC-UV法測(cè)定Zole制劑含量的方法。
　　 方法：以Phenomenon C18色譜柱為固定相，流動(dòng)相為三乙胺（20mM用冰醋酸調(diào)pH為7.0）-甲醇（99：1），流速為1mL·min-

13、1，柱溫為室溫。色譜流出液與過(guò)硫酸鉀混合后流經(jīng)一聚四氟乙烯盤管制成的光化學(xué)反應(yīng)器時(shí)，Zole被氧化成正磷酸鹽，正磷酸鹽再與MoO、維生素C反應(yīng)生成磷鉬雜多絡(luò)合物，用紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為650nm。
　　 結(jié)果：實(shí)現(xiàn)了Zole及其有關(guān)物質(zhì)（磷酸鹽和亞磷酸鹽）分離和檢測(cè)。Zole在20.00～250.0μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999），檢測(cè)限為1μg·mL-1。對(duì)于注射用Zole的平均回收率為98.