新型微萃取方法的建立及其在黃連生物堿類化合物分析中的應用.pdf

1、目的：
　　在前期復雜樣品分析研究基礎之上，提出和建立了中空纖維雙溶劑協(xié)同微萃取和氧化石墨烯/平面繭雙膜固相微萃取兩種新型微萃取方法，并結合高效液相色譜法應用于黃連微量生物堿類化合物的萃取濃縮和含量測定。
　　方法：
　　本研究第一部分主要利用中空纖維細胞捕獲法篩選出黃連中一系列抗腫瘤活性成分，并以其中的藥根堿，黃連堿，巴馬汀和小檗堿作為目標化合物，利用管壁充滿萃取溶劑、管腔充滿輔助萃取溶劑的中空纖維萃取富集目標分析物

2、，由此提出并建立了中空纖維雙溶劑協(xié)同微萃取方法。優(yōu)化萃取條件并進行方法學考察，結合HPLC技術對目標分析物進行分離測定，定義及計算了雙溶劑協(xié)同微萃取方法的協(xié)同微萃取系數(shù)（synergy microextraction coefficient，CSME），闡明了HF-DSSME的萃取機理。本研究第二部分建立了氧化石墨烯/平面繭雙膜固相微萃取方法，結合HPLC對黃連藥根堿，黃連堿，巴馬汀和小檗堿等活性成分進行萃取濃縮和含量測定，制備氧化石墨

3、烯/平面繭雙固相膜，優(yōu)化萃取條件并進行方法學考察，計算目標分析物的富集倍數(shù)，并與黃連中生物堿類化合物的其它萃取濃縮方法進行比較，闡明其萃取機理。
　　結果：
　?。?）本研究第一部分在優(yōu)化的實驗條件下，采用中空纖維細胞捕獲法篩選出的生物堿類活性成分的細胞捕獲因子在1.1-5.2之間；中空纖維雙溶劑協(xié)同微萃取法對目標分析物的富集倍數(shù)在6-71.8倍之間；方法測定的4種生物堿的線性范圍均為：0.01-10μg/mL（r=0.99

4、80-0.9999）；檢測限為0.1-0.8 ng/mL，定量限為1-5 ng/mL；日內(nèi)和日間精密度分別為1.6％-8.3%和4.4%-9.2%；回收率為102.8%-104.1%。（2）本研究第二部分經(jīng)條件優(yōu)化后，氧化石墨烯/平面繭雙膜固相微萃取法對目標分析物的富集倍數(shù)的在85-122倍之間；線性范圍：藥根堿，巴馬汀和小檗堿為0.001-1.5μg/mL，黃連堿在0.05-1.5μg/mL（r=0.9975-0.9997）；檢測限為

5、0.1-1.0 ng/mL，定量限為0.7-1.5 ng/mL；日內(nèi)和日間精密度分別為0.9%-5.4%和5.7%-10.4%；回收率為95.1%-105.0%。
　　結論：
　　總之，與黃連中生物堿類化合物的其他萃取方法相比，兩種萃取技術均具有制備簡單，材料易得，綠色環(huán)保，靈敏有效，富集倍數(shù)高等優(yōu)點，二者與HPLC結合可成功應用于黃連微量生物堿類活性成分的濃縮富集和含量測定。兩種方法在中藥微量活性成分的萃取濃縮和分析測定中