多肽P-15改性后的豬松質(zhì)骨支架材料與人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞相容性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究經(jīng)P-15多肽改性后的豬松質(zhì)骨支架材料是否更適合人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的粘附、增殖以及分化。
　　方法：(1)綜合目前去抗原方法對(duì)豬松質(zhì)骨支架材料進(jìn)行脫脂、脫蛋白處理。(2)傳代培養(yǎng)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞至第5代。(3)將骨支架材料分為兩組，每組36塊，實(shí)驗(yàn)組用P-15溶液浸泡24小時(shí)，室溫干燥，對(duì)照組用PBS溶液浸泡24小時(shí)，室溫干燥。每塊骨支架材料上滴加濃度為1×106/ml的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞懸液250μl。分別在第

2、6、12、24、48小時(shí)采用胰蛋白酶消化細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算兩組的細(xì)胞粘附率；在第3、5、7、9天同樣采用胰蛋白酶消化細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)得兩組的細(xì)胞增殖情況，繪制增殖曲線(xiàn)；在3、7、14、21天將支架上細(xì)胞消化、裂解，測(cè)其成骨堿性磷酸酶的活性。
　　結(jié)果：(1)經(jīng)過(guò)脫脂、脫蛋白處理的骨支架材料外觀(guān)呈白色，輕度發(fā)灰，似海綿狀的多孔隙材料，孔壁光滑，總體硬度無(wú)明顯變化，但脆性增加。(2)原代 hAMSCs呈梭形、多角形或星形，貼壁生長(zhǎng)，傳代培養(yǎng)后

3、，細(xì)胞表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞樣克隆，呈細(xì)長(zhǎng)的梭形，排列緊密，多呈放射狀或漩渦狀貼壁生長(zhǎng)。(3) hAMSCs在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組支架上細(xì)胞粘附率有明顯不同，第6小時(shí)實(shí)驗(yàn)組粘附率（20.0±2.6，％）>對(duì)照組（19.3±1.5，%），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)組第12小時(shí)（40.7±1.5，%）、24小時(shí)（45.3±2.5，%）、48小時(shí)（52.7±1.2，%）粘附率均>對(duì)照組12小時(shí)（24.3±4.1，%）、24小時(shí)（31.0±1

4、.7，%）、48小時(shí)（37.3±4.7，%）粘附率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組第3天（20.7±2.5，×104）、第5天（30.3±2.3，×104）、第7天（42.3±3.5，×104）、第9天（41.3±6.5，×104）增殖細(xì)胞數(shù)均>對(duì)照組第3天（14.7±0.6，×104）、第5天（20.7±4.0，×104）、第7天（29.7±1.1，×104）、第9天（33.0±5.6，×104）增殖細(xì)胞數(shù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、差異（P<0.05），比較結(jié)果實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖情況明顯優(yōu)于對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組第3天（0.362±0.052）、第7天（0.551±0.011）、第14天（0.785±0.034）、第21天（0.812±0.125） ALP OD值均>對(duì)照組第3天（0.171±0.027）、第7天（0.383±0.055）、第14天（0.445±0.043）、第21天（0.580±0.662）ALP OD值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論