骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)合異體骨治療骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 骨缺損的治療是目前骨科的難題之一。本實驗選用體外培養(yǎng)的日本大耳兔骨髓間充質(zhì)干細胞作為種子細胞來源，同種異體骨作為細胞載體復(fù)合修復(fù)新西蘭大白兔橈骨骨缺損，觀察骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)合同種異體骨移植治療新西蘭大白兔橈骨骨缺損的療效，為骨組織工程治療骨缺損種子細胞的來源及載體的選擇尋求一條新的途徑。
　　 方法：
　　 先取3只3月齡的日本大耳兔，體重2.5 kg左右，用速眠新注射液（0.15ml/kg）麻醉

2、成功后，隨機選擇一側(cè)脛骨，予以脫毛，徹底消毒，在嚴格無菌條件下于脛骨結(jié)節(jié)下方穿刺，共抽取骨髓4毫升，肝素鈉抗凝，將骨髓離心后進行培養(yǎng)并傳代，14天后培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞至第三代，細胞濃度達到5x107/cm3備用；取完骨髓后將三只大耳兔空氣栓塞致死，無菌條件下取出雙側(cè)尺橈骨，截去兩段干骺端后得到長約5cm的骨段，將每段骨截成3段各長約1.5cm的骨段，除凈軟組織及骨髓，表面脫鈣后-80℃深低溫冷凍2周；應(yīng)用時予以解凍，將處理好的同種異體

3、骨與骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)合培養(yǎng)24小時后備用。
　　 再取21只新西蘭大白兔，雌雄不限，體重在2.5-3kg，用速眠新注射液（0.15ml/kg）麻醉成功后，雙上肢橈骨處脫毛、消毒、鋪無菌單，手術(shù)顯露雙側(cè)橈骨中段，制成1.5cm長的骨-骨膜缺損區(qū)，隨機選擇一側(cè)移植骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合同種異體骨并作為實驗組，另一側(cè)植入單純同種異體骨做為對照組；空白對照組不做任何處理；處理后的動物分別于術(shù)后4、8、12周隨機抽取5只實驗組及對照組大白

4、兔和2只空白組大白兔處死觀察大體情況、X線照片檢查及HE染色組織學(xué)檢查。將結(jié)果進行對比，進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.大體組織學(xué)觀察：術(shù)后4、8、12周見實驗組骨缺損區(qū)骨痂組織明顯多于對照組：術(shù)后4、8周實驗組周圍軟組織內(nèi)可見類骨痂樣組織，骨缺損區(qū)可見新骨生成；對照組軟組織內(nèi)沒有明顯類骨痂樣組織，僅骨缺損兩端有骨痂形成；空白組表面僅為一層較致密的纖維組織膜包裹瘢痕組織；術(shù)后12周實驗組骨缺損區(qū)生成的新骨直徑明

5、顯大于宿主骨，對照組骨缺損處仍有明顯的凹陷，不規(guī)則，新生骨直徑明顯小于宿主骨；空白組表面仍為纖維組織包裹。
　　 2.X線檢查：術(shù)后4、8、12周顯示實驗組骨缺損區(qū)骨痂量明顯多于對照組及空白組，12周后骨缺損達到骨性愈合，骨痂量明顯多于骨缺損兩端宿主骨，而且部分髓腔已通；對照組骨缺損區(qū)也達到骨性愈合，但直徑明顯低于宿主骨組織；空白對照組僅靠近尺骨側(cè)有少量骨痂形成。
　　 3.組織學(xué)檢查：術(shù)后4、8、12周顯示實驗組形成的