STAT3、Cyclin D1蛋白在EGCG促進鼻咽癌細胞CNE-2凋亡中的表達變化及意義.pdf

1、目的：鼻咽癌是我國廣東、廣西及福建等南方地區(qū)的常見惡性腫瘤之一，目前其主要治療方法是放療加化療等綜合性治療，但其5年生存率只有50％左右，晚期病人的治療效果及生存時間更差。本研究旨在觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）體外對鼻咽癌CNE2細胞的生長影響，同時通過分析其過程中的STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達變化，揭示EGCG抗鼻咽癌的機制，為開發(fā)與尋找新藥以提高鼻咽

2、癌的治療效果提供實驗依據(jù)。
　　方法：1.實驗室體外條件下培養(yǎng)鼻咽癌低分化細胞株CNE2，用不同濃度的EGCG（0、40、80、160mg/L）干預(yù)24h、48h、72h后，分別于倒置顯微鏡下觀察CNE2細胞的形態(tài)學(xué)改變。2.使用不同濃度的EGCG作用CNE2細胞24h、48h、72h后，應(yīng)用MTT法間接檢測細胞增殖的變化，并計算其增殖抑制率。3.使用不同濃度的EGCG作用于CNE2細胞48h后，使用Hoechst33258染色觀

3、察細胞凋亡情況，并計算其凋亡率。4.應(yīng)用Transwell細胞侵襲實驗檢測不同濃度EGCG作用后的CNE2細胞侵襲作用的變化。5.使用流式細胞儀檢測不同濃度的EGCG作用鼻咽癌細胞株CNE2不同時間后對細胞周期的影響。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測EGCG抗鼻咽癌細胞株CNE2過程中STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達變化。
　　結(jié)果：1.倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)CNE2細胞分裂相變少，部分細胞變圓，隨著EGCG濃度

4、的增加和作用時間的延長，培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)越來越多的細胞漂浮及壞死的現(xiàn)象。2.MTT法檢測結(jié)果顯示，隨著EGCG的濃度增加及作用時間延長，EGCG對鼻咽癌細胞株CNE2的增殖抑制作用不斷增加，且呈濃度與時間依賴性（p0.05）。3.Hochest33258染色結(jié)果顯示，EGCG處理CNE2細胞后出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變?nèi)绾怂榱?、核濃縮等。與對照組比較，隨著EGCG濃度的增加，凋亡細胞數(shù)不斷增多（p＜0.05）。4.流式細胞儀檢測結(jié)果顯示：不

5、同濃度的EGCG(0、40、80、160mg/L)分別作用于CNE2細胞24h、48h后，停滯在G1/G0期細胞百分率分別為：（46.67±0.38）%、（55.20±0.33）%、（62.33±0.28）%、（68.65±0.40）%和（49.12±0.28）%、（57.73±0.45）%、（64.36±0.26）%、（69.62±0.33）%。與對照組比較，各實驗組G1/G0期細胞百分率明顯增加(P0.05)，各實驗組兩兩比較差異顯

6、著(P0.05)，呈濃度與時間依賴性。5.不同濃度EGCG作用CNE2細胞后，Transwell細胞侵襲實驗結(jié)果顯示：隨著EGCG濃度的升高，與對照組相比，CNE2細胞的侵襲作用呈濃度依賴性減弱（p0.05）。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測結(jié)果顯示：CNE2細胞中STAT3、MMP-2、CyclinD1mRNA的相對表達量隨著EGCG濃度升高與作用時間延長有降低趨勢（P0.05）。
　　結(jié)論：1.EGCG呈濃度依賴性與時間依