LMP1調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子EGFR和STAT3在鼻咽癌細(xì)胞核相互作用的研究.pdf

1、真核生物基因的表達(dá)調(diào)控主要是轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控,其受順式作用元件與反式作用因子及其相互作用調(diào)節(jié),兩者結(jié)合才能共同實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。真核生物基因順式作用元件分為啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子,是調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的特定DNA序列；參與調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄的的反式作用因子(也稱為轉(zhuǎn)錄因子)是能直接或間接識(shí)別或結(jié)合在各順式作用元件核心序列上,參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄效率的一類蛋白質(zhì)。
　　 表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor recepto

2、r,EGFR)是一個(gè)分子質(zhì)量為170 kD的跨膜糖蛋白,屬于受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTKs)家族。近年來,在許多腫瘤如皮膚癌、乳腺癌、宮頸癌、膀胱癌、卵巢癌等的細(xì)胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn)高水平的EGFR表達(dá),其作為一種新型轉(zhuǎn)錄因子在核內(nèi)獨(dú)立或作為轉(zhuǎn)錄共活化子,與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用于與細(xì)胞周期行進(jìn)或細(xì)胞增殖密切相關(guān)的靶基因,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。轉(zhuǎn)錄因子STAT3(signaltransducer and

3、activation of transcription,STAT3)是多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子發(fā)揮作用的關(guān)鍵信號(hào)分子,其通過酪氨酸磷酸化的STAT之間形成同源二聚體或異源二聚體活化后移位至細(xì)胞核,激活多種相關(guān)下游靶基因的表達(dá)。STAT3在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、免疫逃避、促進(jìn)血管生成及腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)功能的作用。
　　 EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)是一種DNA致瘤病毒

4、,與B細(xì)胞、上皮細(xì)胞、T細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化有關(guān),并與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),其致瘤作用主要是通過病毒編碼蛋白影響宿主細(xì)胞的基因表達(dá)及相應(yīng)的生物學(xué)行為實(shí)現(xiàn)。潛伏膜蛋白1(Latent Membrane Protein
　　 1,LMP1)是EBV編碼的癌蛋白,其生物學(xué)功能涉及細(xì)胞轉(zhuǎn)化、凋亡、分化、細(xì)胞周期行進(jìn)以及參與惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　 有研究發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌細(xì)胞中LMP1能調(diào)控EGFR表達(dá)和上調(diào)EGFR磷酸化水平,進(jìn)而促

5、進(jìn)細(xì)胞增殖,并發(fā)現(xiàn)LMP1可以調(diào)控EGFR核移位,并呈EGF配體非依賴性。同時(shí),不少作者認(rèn)為EGFR需與其他能直接結(jié)合于DNA的轉(zhuǎn)錄因子相互作用方能發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖的生物學(xué)作用。并有報(bào)道發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌細(xì)胞中存在LMP1激活的JAK/STAT信號(hào)通路,通過JAK3促進(jìn)STAT3705位酪氨酸磷酸化,磷酸化活化后的STAT3即核移位并核內(nèi)積聚,并且LMP1調(diào)控磷酸化STAT3核移位呈705位酪氨酸磷酸化依賴性。因此,我們推測(cè)LMP1有可能通過

6、誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子EGFR和STAT3核移位并調(diào)節(jié)其相互作用,從而在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮新的生物學(xué)作用。
　　 為觀察在LMP1調(diào)控下轉(zhuǎn)錄因子EGFR和STAT3在鼻咽癌細(xì)胞核內(nèi)是否存在核移位和共定位,選擇激光共聚焦掃描顯微鏡方法進(jìn)行檢測(cè),以不表達(dá)LMP1的鼻咽癌CNE1細(xì)胞為陰性對(duì)照,發(fā)現(xiàn)在LMP1陽性表達(dá)的鼻咽癌CNE1-LMP1細(xì)胞中存在EGFR和STAT3蛋白的核移位并且兩者存在共定位；應(yīng)用免疫共沉淀及Western-blot方

7、法檢測(cè),顯示LMP1可促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子EGFR和STAT3呈復(fù)合物結(jié)合；為明確兩者復(fù)合物結(jié)合的亞細(xì)胞定位,分別提取了胞漿和核蛋白,進(jìn)一步應(yīng)用免疫共沉淀及Western-blot方法檢測(cè),揭示了EGFR和STAT3復(fù)合物結(jié)合的亞細(xì)胞定位主要是細(xì)胞核。
　　 綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)了LMP1表達(dá)陽性的鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)存在轉(zhuǎn)錄因子EGFR和STAT3的核移位和共定位,LMP1可調(diào)節(jié)EGFR和STAT3呈復(fù)合物結(jié)合并且其結(jié)合的亞細(xì)胞定