鼻咽癌中LMP1對miRNA-200家族及ZEB1調(diào)控作用研究.pdf

1、目的:檢測鼻咽癌中LMP1、miR-200家族，ZEB1和E-cadherin等因子表達，并探討它們之間的調(diào)控關(guān)系，研究其參與NPC侵襲轉(zhuǎn)移可能的相關(guān)分子機制，對控制和防治鼻咽癌具有重要意義。
　　方法:1.免疫組織化學(xué)方法研究ZEB1、LMP1和E-cadherin在NPC組織和鼻咽炎性組織中蛋白表達水平，并分析三種蛋白表達的關(guān)聯(lián)性
　　2.使用pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒對鼻咽癌細胞株CNE1，CNE2

2、進行轉(zhuǎn)染，并使用實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)技術(shù)及免疫印跡法(Western Blot，WB)檢測轉(zhuǎn)染pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒前、后LMP1表達情況。
　　3.qRT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染和非轉(zhuǎn)染細胞株中miR-200家族、LMP1、ZEB1和E-cadherin mRNA表達水平。WB法研究LMP1、ZEB1和E-cadherin蛋白在轉(zhuǎn)染pIRES

3、2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒前、后CNE1，CNE2細胞系中的表達水平。
　　4.用SPSS16.0軟件做統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用均數(shù)±標準差(x±s)表示，用獨立樣本t檢驗（方差齊）或者校正t檢驗（方差不齊）來比較兩組間差異，計數(shù)資料率的比較用Fisher確切概率法（總例數(shù)＜40例），用Pearson相關(guān)分析或者Spearman等級相關(guān)分析做相關(guān)性分析。P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果: L

4、MP1、ZEB1及E-cadherin在鼻咽癌組織中的陽性表達率分別為53.8％、71.8％，20.5％，其中LMP1、ZEB1在鼻咽癌組織中的陽性率均明顯高于鼻咽炎性組織，組間比較有顯著差異(p＜0.05)。分析NPC組織中LMP1與ZEB1和E-cadherin蛋白表達的關(guān)聯(lián)性，結(jié)果顯示:LMP1和ZEB1的蛋白表達成正相關(guān)(r=0.563，p＜0.05)，與E-cadherin的蛋白表達成負相關(guān)(r=-0.421，p＜0.05)，

5、而ZEB1的表達與E-cadherin呈負相關(guān)(r=-0.387，p＜0.05)。
　　2.轉(zhuǎn)染結(jié)果:轉(zhuǎn)染后CNE1，CNE2 qRT-PCR及WB結(jié)果均表明LMP1表達有差異，說明轉(zhuǎn)染成功。
　　3.轉(zhuǎn)染和非轉(zhuǎn)染細胞株qRT-PCR檢測檢驗結(jié)果:①LMP1、ZEB1mRNA在轉(zhuǎn)染pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒的CNE1和CNE2中的表達水平均高于相應(yīng)非轉(zhuǎn)染NPC細胞（均p＜0.05）;E-cadherin

6、mRNA在轉(zhuǎn)染組CNE1和CNE2中表達均下調(diào)（均p＜0.05）。②瞬轉(zhuǎn)pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒的CNE1細胞中miR-200a，miR-200c和miR-141的表達水平低于對照組，其中miR-141下調(diào)明顯;miR-200b的表達水平高于對照組，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均p＜0.05）。③瞬轉(zhuǎn)pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒的CNE2細胞中miR-200a、miR-200c和miR-141的表達水

7、平均低于對照組，其中miR-141下調(diào)最明顯，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均p＜0.05）。
　　4.轉(zhuǎn)染和非轉(zhuǎn)染細胞株WB法檢測檢驗結(jié)果:CNE1和CNE2細胞轉(zhuǎn)染pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒后，LMP1與ZEB1的表達均上調(diào)，其中LMP1上調(diào)明顯，E-cadherin的表達均下調(diào)，組間比較有顯著差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.鼻咽癌組織中LMP1和ZEB1的蛋白表達成正相關(guān)，而ZEB1的表