LMP-1對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1 miRNA表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的: 本研究旨在探討人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE1- LMP1中miRNAs的差異性表達(dá),并預(yù)測(cè)異常表達(dá)的 miRNAs可能調(diào)控的靶基因。首次探討LMP-1對(duì)鼻咽癌細(xì)胞中miRNAs表達(dá)譜的影響并對(duì)EBV癌基因LMP-1的促癌機(jī)理做更深一步的研究,為鼻咽癌的診斷和治療提供相關(guān)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　方法: 培養(yǎng)人鼻咽癌細(xì)胞株 CNE1和轉(zhuǎn)入了癌基因 LMP-1的鼻咽癌細(xì)胞株CNE1-LMP1,用免疫組化以及RT-PCR檢測(cè)CNE1-

2、LMP1中LMP-1的表達(dá),并分別提取細(xì)胞總 RNA;利用 miRNAs芯片技術(shù),檢測(cè)兩種細(xì)胞株的miRNAs的表達(dá),對(duì)其表達(dá)譜進(jìn)行差異性分析;運(yùn)用MiRanda、TargetScan、PicTar、DIANA—microT軟件預(yù)測(cè)miRNAs可能調(diào)控的靶基因。
　　結(jié)果: miRNA在不同的腫瘤細(xì)胞中具有特定的表達(dá)水平和模式,人們可以通過對(duì)人腫瘤組織中的miRNA表達(dá)譜與正常的組織表達(dá)譜進(jìn)行對(duì)比分析,對(duì)不同腫瘤特定的miRNA

3、水平進(jìn)行鑒定,從而有助于腫瘤的早期診斷和治療。由于miRNA是基因表達(dá)和蛋白質(zhì)翻譯過程中的調(diào)節(jié)分子,在腫瘤的發(fā)生過程中起調(diào)控的樞紐作用,因此已有專家預(yù)測(cè),把miRNA作為腫瘤生物治療的靶分子將比編碼基因作為靶分子更加有效。LMP-1在EBV潛伏感染的鼻咽癌中有癌基因的特性,在鼻咽癌發(fā)生起重要作用。目前在鼻咽癌中EBV編碼的LMP-1是否能影響miRNA的表達(dá),從而調(diào)節(jié)下游靶基因的表達(dá),引起腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的改變的研究尚未見報(bào)導(dǎo)。我們以

4、miRNAs芯片為平臺(tái)初步研究了有以及無(wú)LMP-1表達(dá)的鼻咽癌細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜,在鼻咽癌細(xì)胞CNE1和CNE1-LMP1中檢出32個(gè)存在差異表達(dá)的miRNAs。在共同表達(dá)的20個(gè)分子中,在CNE1-LMP1中表達(dá)降低的有8個(gè);hsa-miR-137、hsa-miR-151、hsa-miR-196a、hsa-miR-197、hsa-miR-202、hsa-miR-373、hsa-miR-488和hsa-miR-213;另外12個(gè)表達(dá)

5、升高,有6個(gè)升高達(dá)2倍以上:hsa-miR-19b、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-22、hsa-miR-149、hsa-miR-150和hsa-miR-188。對(duì)CNE1-LMP1細(xì)胞顯著異常表達(dá)的miRNAs進(jìn)行信息學(xué)分析,篩選出相應(yīng)的靶基因。并發(fā)現(xiàn)其靶點(diǎn)非常廣泛,涉及到癌基因、細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、血管生成、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。
　　結(jié)論: 獲得了人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE1-LMP1 miRNAs的差異表達(dá)譜。其