類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清sFas-sFasL水平和外周血CD20+CD95+表達(dá)狀況的研究.pdf

1、目的:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關(guān)節(jié)炎和血管翳為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病,B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生類風(fēng)濕因子(Rheumatoid factor,RF)及抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anticyclic citrullinatedpeptide antibody,anti-CCP)等RA相關(guān)自身抗體,這些自身抗體在滑膜中依靠補(bǔ)體作用使抗原-抗體復(fù)合物激活巨噬細(xì)胞,從而造成關(guān)節(jié)的破壞,表明B細(xì)胞在RA發(fā)病機(jī)

2、制起著重要作用。細(xì)胞凋亡作為一種調(diào)節(jié)機(jī)制,使T、B細(xì)胞保持相對平衡狀態(tài),維持正常的細(xì)胞免疫和體液免疫。RA發(fā)病進(jìn)程中可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的異常,而Fas(CD95)/FasL系統(tǒng)在凋亡過程中的起重要調(diào)節(jié)途徑。本研究通過檢測RA患者外周血B細(xì)胞(CD20+細(xì)胞)和凋亡因子CD95的變化,以及血清、關(guān)節(jié)積液中sFas/sFasL的水平探討B(tài)細(xì)胞和凋亡在RA發(fā)病中的作用。
　　 方法:
　　 選取RA患者30例,所有患者均符合200

3、9年美國風(fēng)濕病學(xué)院(American rheumatism institute)和歐洲風(fēng)濕病防治聯(lián)合會(Europeancongress prevemion federation)的RA分類標(biāo)準(zhǔn),所選病例均為初治患者,既往未曾應(yīng)用糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)、改變病情抗風(fēng)濕藥(diseasemodilying antirheumatic drug,DMARD)及生物制劑治療。取20例健康人作為正常對照。兩組均留取血清

4、樣本,病例組同時留取關(guān)節(jié)液。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者記錄年齡、病程、癥狀、關(guān)節(jié)腫痛數(shù)、DAS28評分以及類風(fēng)濕因子(RF)、血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、環(huán)瓜氨酸抗體(anti-CCP)、免疫五項(IgA、IgM、IgG、C3、C4)等相關(guān)指標(biāo)。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(avidin biotin peroxidase complex enzyme-linkedimmunosorbent assay,ABC-ELISA)法測定血清

5、和關(guān)節(jié)液中sFas/sFasL的水平,并與RF、anti-CCP、ESR、CRP等臨床指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析;流式細(xì)胞儀(Flow cytometric,FCM)檢測RA患者外周血B細(xì)胞(CD20)、凋亡因子CD95的表達(dá)情況,并與RF、anti-CCP、ESR、CRP進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,計量資料采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩樣本比較用獨立樣本t檢驗,多個樣本比較則用方差分析。相關(guān)性采用

6、直線相關(guān)分析,以P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者30例,男性6例,女性24例;平均年齡(48.73±14.86)歲;平均病程(32.87±30.60)月。其中伴有膝關(guān)節(jié)積液患者20例,男性3例,女性17例;正常對照組20例,男性5例,女性15例;平均年齡(45.00±11.08)歲。RA組與健康對照組在年齡及性別構(gòu)成等方面無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。RA組ESR(67.03

7、±29.88)mm/h、CRP(32.06±22.68)mg/L、RF(413.58±463.72)IU/ml、DAS28評分(5.89±1.14)。
　　 2:RA患者血清sFas與sFasL的水平分別為(3.78±1.02)μg/L、(0.77±0.41)μg/L,均較正常對照組(2.68±0.81)μg/L、(0.36±0.21)μg/L顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3:RA患者關(guān)節(jié)液sFas

8、與sFasL的水平分別為(5.62±1.50)μg/L、(1.19±0.42)μg/L,均較血清sFas/sFasL水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 4:RA患者外周血CD20+、CD95+及CD20+/CD95+細(xì)胞的表達(dá)率分別為:(10.09±2.49)％、(41.35±7.63)％、(1.8±1.02)％,CD20+細(xì)胞表達(dá)率較正常對照組(12.28±2.55)％顯著降低(P＜0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)

9、意義;CD95+細(xì)胞表達(dá)率較正常對照組(29.20±8.21)％顯著升高(P＜0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;CD20+/CD95+細(xì)胞表達(dá)率較正常對照組(2.43±1.11)％顯著降低(P＜0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 5:RA患者血清sFas與sFasL的水平與病情活動指標(biāo)相關(guān)性:sFas水平與ESR及CRP呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r值分別為0.76,0.81,P＜0.01);sFasL水平與ESR、CRP呈顯著正相關(guān)關(guān)系(

10、r值分別為0.84,0.54,P＜0.01),sFas與sFasL均未發(fā)現(xiàn)與DAS28、RF有明顯相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。
　　 6:RA患者CD20+、CD95+及CD20+/CD95+細(xì)胞表達(dá)率與實驗室指標(biāo)相關(guān)性:通過直線相關(guān)性分析顯示,外周血CD20+、CD95+及CD20+/CD95+細(xì)胞表達(dá)率與血沉、C-反應(yīng)蛋白、RF、DAS28評分均無明顯相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1:RA患者

11、血清sFas及sFasL高水平表達(dá),且與ESR、CRP均呈顯著正相關(guān)關(guān)系,說明sFas及sFasL,可能作為病情活動指標(biāo),對RA病情監(jiān)測有應(yīng)用價值。
　　 2:RA患者的病變關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)液中sFas及sFasL的水平高于血清水平,提示sFas及sFasL可能在RA外周關(guān)節(jié)滑膜、關(guān)節(jié)軟骨病變中起重要作用。
　　 3:RA患者外周血CD20+細(xì)胞表達(dá)率低于正常對照組,外周血CD95+細(xì)胞表達(dá)率高于正常對照組,外周血CD20+/