移植人細(xì)胞的慢性粒細(xì)胞白血病小鼠模型的構(gòu)建.pdf

1、【研究背景】慢性粒細(xì)胞白血病(CML)是起源于造血干細(xì)胞的惡性骨髓增殖性腫瘤。90％以上患者有Ph染色體,t(9;22)(q34;q11)染色體易位并形成BCR-ABL融合基因,編碼酪氨酸激酶,使正常細(xì)胞生長凋亡失去調(diào)控從而導(dǎo)致白血病的發(fā)生。酪氨酸激酶可以作為腫瘤靶向治療的靶點(diǎn),上世紀(jì)末,酪氨酸激酶抑制劑(TKIs)的發(fā)明與應(yīng)用,被稱為腫瘤靶向治療的完美典范。但TKIs治療一旦中止,疾病常常會(huì)復(fù)發(fā),說明TKIs只能抑制但不能將疾病治愈。

2、新的臨床問題重新激活對(duì)CML病理生理學(xué)機(jī)制的深入研究,從干細(xì)胞特性和骨髓造血微環(huán)境研究CML發(fā)病機(jī)制,開發(fā)新的治療方案。因此有必要重新建立合理的疾病模型,為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究奠定可靠基礎(chǔ)。
　　【研究目的】通過移植人類細(xì)胞的方法構(gòu)建疾病模型,特別是在國際上首次應(yīng)用CML患者骨髓原代細(xì)胞在新生NOG小鼠體內(nèi)構(gòu)建CML模型,較好地反映疾病在體內(nèi)的演變過程,為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究及個(gè)體化治療方案的探索提供一個(gè)很好的平臺(tái),為CML發(fā)病機(jī)制的研究、進(jìn)行新

3、藥療效試驗(yàn)及基因治療等提供理想的動(dòng)物模型。
　　【材料與方法】用三種方法將人細(xì)胞移植到小鼠體內(nèi):1.通過局部注射把 K562細(xì)胞移植到 NOD/SCID小鼠脛骨骨髓腔,兩周后發(fā)現(xiàn)局部實(shí)體瘤,流式分析實(shí)體瘤及小鼠骨髓細(xì)胞特異抗原;2.分離CML慢性期患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞,通過顳靜脈注射把白血病細(xì)胞移植到新生NOG小鼠體內(nèi),16周后流式分析檢測骨髓移植物情況;3.用慢病毒載體將BCR-ABL融合基因?qū)肴四殠а杉?xì)胞并移植給NOG小鼠或

4、種植在MS-5基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中,從而觀察是否可以造成CML模型。
　　【結(jié)果】顳靜脈注射CML患者白血病細(xì)胞的NOG小鼠,脾臟組織切片可見白血病浸潤,骨髓可檢測到白血病細(xì)胞(表達(dá)人特異性標(biāo)記抗原CD45);將BCR-ABL融合基因克隆到慢病毒載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,蛋白分子雜交分析可檢測到BCR-ABL(p210)表達(dá),載體克隆成功,可以用于構(gòu)建動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)。此部分實(shí)驗(yàn)仍在進(jìn)展中;移植K562細(xì)胞的NOD/SCID小鼠,注射部