TRPM7通道在新生大鼠心肌細(xì)胞功能的初步研究.pdf

1、目的：研究TRPM7在新生大鼠心肌細(xì)胞中的功能方法①利用RT-PCR半定量檢測(cè)大鼠心肌細(xì)胞TRPM7和其他六種Mg2+轉(zhuǎn)運(yùn)體在出生后不同時(shí)間的表達(dá)情況。②原代培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細(xì)胞，用siRNA技術(shù)和TRPM7通道阻斷劑2-APB分別作用于心肌細(xì)胞，RT-PCR，蛋白免疫印跡檢測(cè)siRNA的沉默效率和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSSll·5軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果①RT-PCR半定量觀(guān)察到大鼠心肌細(xì)胞上七種Mg2+

2、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在出生后不同時(shí)期都有不同程度的表達(dá)，其中TRPM7在各個(gè)時(shí)期表達(dá)較穩(wěn)定，并且表達(dá)量明顯高于其他六種Mg2+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。②培養(yǎng)的大鼠乳鼠心肌細(xì)胞中經(jīng)RT-PCR和蛋白免疫印跡檢測(cè)，siRNA下調(diào)TRPM7效率在mRNA水平和蛋白水平均在70％以上；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率數(shù)據(jù)：轉(zhuǎn)染TRPM7-siRNA實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率為（33.69±2.06）％，與轉(zhuǎn)染無(wú)序siRNA對(duì)照組細(xì)胞（10.43±0.99）％比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0

3、.01）。③采用不同濃度2-APB（0.01uM0.1uM1.0uM）孵育，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率分別為（19.00±0.87）％，（23.06±1.48）％和（28.41±0.94）％。其中加藥0.1uM驗(yàn)組與未加藥對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），加藥1.0uL實(shí)驗(yàn)組與未加藥對(duì)照組（17.8±0.49）％比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論TRPM7對(duì)心肌細(xì)胞的生存有重要的作用。這種作用可能與TRPM7參與的細(xì)胞內(nèi)Mg