MDCK細(xì)胞Kca的鑒定及粉防己堿（Tet）對(duì)MDCK細(xì)胞Kca的影響.pdf

1、目的：MDCK(Madin-Darby Canine Kidney)細(xì)胞鈣激活鉀通道（calcium-activated potassium channel Kca）的鑒定及探討粉防己堿對(duì)該通道電生理特性的影響。 方法：（1）MDCK細(xì)胞傳代培養(yǎng)，取單個(gè)散在、邊緣光滑、折光性適中的細(xì)胞，利用膜片鉗單通道記錄技術(shù)，在內(nèi)面向外式（inside-out）膜片上，利用改變?cè)∫褐锈涬x子濃度和鈣離子濃度的方法對(duì)通道進(jìn)行鑒定。（2）在

2、inside-out膜片上記錄不同濃度的粉防己堿（Tet）對(duì)MDCK細(xì)胞Kca的電流幅值(Current Amplitude, Am)、開(kāi)放概率(Probability of Open, Po)、平均開(kāi)放時(shí)間(Mean Open Time,To)、平均關(guān)閉時(shí)間(Mean Close Time,Tc)的影響，并對(duì)電流幅值的全點(diǎn)直方圖(All-Points Histogram)進(jìn)行函數(shù)擬合，結(jié)果采用專用軟件進(jìn)行采樣和分析。

3、結(jié)果：（1）在對(duì)稱性高鉀溶液([K+]o：[K+]I=140mmolL-1/140mmolL-1，[K+]O為膜外的鉀離子濃度，[K+]I為膜內(nèi)鉀離子濃度。)中、inside-out膜片上、膜電位在0mV--+100mV范圍內(nèi)，主要記錄到電導(dǎo)為50.475±0.600pS(n=5)的外向通道電流，Am、Po隨電壓增加而增加，無(wú)整流特性。反轉(zhuǎn)電位為0mV。（2）在inside-out膜片上、膜電位在0mV--+100mV范圍內(nèi)、浴液中游離

4、[Ca2+]為10-7molL -1時(shí)，浴液中鉀離子濃度由140mmolL-1改變?yōu)?5mmolL-1，在0mV記錄到內(nèi)向電流，反轉(zhuǎn)電位由0mV增加為+30mV，電導(dǎo)為50.275±0.294pS(n=5)。（3）在對(duì)稱性高鉀溶液、inside-out膜片、膜電位+60mV時(shí)。在浴液中加入不同濃度的鈣離子（0molL-1、10-8molL-1、10-7molL-1、10-6molL-1、10-5molL-1），從10-7molL-1開(kāi)始

5、，通道活動(dòng)濃度依賴性增加，Po由0molL-1的0.0096±0.0019和10-8molL-1的0.0110±0.0017分別增至0.0479±0.0020、0.1000±0.0043、0.2400±0.0017，且To延長(zhǎng)、Tc縮短，Am變化不顯著，洗脫后通道活動(dòng)完全恢復(fù)。（4）在對(duì)稱性高鉀溶液、inside-out膜片上，膜電位為+60mV、浴液中游離[Ca2+]為10-7molL-1時(shí)，浴液中加入不同濃度的粉防己堿（Tet）(0

6、molL-1 、7.5×10-6 molL-1、1.5×10-5molL-1、3.0×10-5 molL-1、6.0×10-5 molL-1)，Po分別為0.0500±0.0015、0.0530±0.0010、0.2700±0.0068、0.1200±0.0042、0.0099±0.0012，Am變化不顯著，在1.5×10-5molL-1時(shí)Po、To最大，Tc最小，在6.0×10-5 molL-1時(shí)，Po、To最小，Tc最大。洗脫后，T