基于MARK途徑的RON介導(dǎo)的MDCK細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 EMT是許多腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移早期的一個(gè)重要過程，RON蛋白也可能同時(shí)參與其中。在本研究中，我們通過Western blotting和細(xì)胞劃痕遷移試驗(yàn)分析了RON在MDCK細(xì)胞EMT過程中的作用和機(jī)制。
　　 方法：
　　 2nMMSP刺激72h后，比較經(jīng)RON-cDNA轉(zhuǎn)染的MDCK細(xì)胞和正常MDCK細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，采用劃痕試驗(yàn)分析經(jīng)MSP刺激的細(xì)胞遷移能力改變，Western Blotting分析經(jīng)

2、RON-cDNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的E-cadherin、Vimentin、Snail、Twist等表型相關(guān)蛋白改變及Erk1/2、GSK-3β等相關(guān)信號(hào)分子改變。并分析上述改變能否被信號(hào)通路相關(guān)抑制劑逆轉(zhuǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)刺激后，經(jīng)MDCK細(xì)胞轉(zhuǎn)染RON-cDNA而得的RE7細(xì)胞逐個(gè)分散。
　　 2.由MDCK細(xì)胞轉(zhuǎn)染wt-RON來(lái)源的RE7細(xì)胞與MDCK細(xì)胞相比，不表達(dá)E-cadh

3、erin而表達(dá)vimentin及Snail表達(dá)增加。
　　 3.RE7細(xì)胞經(jīng)MSP刺激后為細(xì)胞遷移能力增加(69％的劃痕區(qū)域被覆蓋)及Erk1/2活性增加和GSK-3β活性下降。
　　 4.上述現(xiàn)象可以被MAPK/ERK激酶特異的化學(xué)抑制劑PD98059(50μM)抑制。
　　 結(jié)論：
　　 RON可以通過Erk1/2途徑介導(dǎo)MDCK細(xì)胞的EMT過程。同時(shí)，GSK-3β能通過這條通路調(diào)節(jié)Snail從而調(diào)控