可緩釋生物活性蛋白的無細(xì)胞組織工程真皮的構(gòu)建研究.pdf

1、目前，組織工程真皮材料依其成分可分為含有細(xì)胞和不含細(xì)胞兩大類。前者如Dermagraff類，雖然它們在臨床試驗中都占有一席之地，但畢竟存在獲取較難、使用不便及潛在的抗原性等不利因素，而且值得注意的是，類似的這些組織工程皮膚產(chǎn)品雖然有些已在美國通過認(rèn)證，如Transcyte等，但在歐洲尚沒有得到認(rèn)可。如此，不含細(xì)胞類的真皮替代物又開始逐漸受到了重視，這其中又主要包括脫細(xì)胞真皮替代物(ADM)和無細(xì)胞真皮替代物兩大類，但在ADM中，如All

2、oderm也不能對抗原成分做到完全意義的去除，且來源有限、結(jié)構(gòu)致密?？紤]到人工材料具有可塑性、可控降解性等優(yōu)點，本課題的研究目標(biāo)即為采用生物高分子材料構(gòu)建一種無細(xì)胞成分的組織工程真皮支架，并在本實驗室研發(fā)的新型戰(zhàn)傷止血材料明膠-殼聚糖-PVA材料的工作基礎(chǔ)上，對其工藝進(jìn)行進(jìn)一步改進(jìn)，再結(jié)合種子細(xì)胞的有效培養(yǎng)上清成份即活性蛋白，使其不但在真皮的缺損重建方面更具優(yōu)勢，而且以其經(jīng)濟(jì)可靠、攜帶和使用方便的特點為戰(zhàn)傷急救敷料的進(jìn)一步研究應(yīng)用打下了

3、較好的基礎(chǔ)。 目的：本研究制備的真皮缺損修復(fù)材料主要希望達(dá)到以下幾點：①有良好的生物相容性，可塑性強(qiáng)，可促進(jìn)受損真皮組織創(chuàng)面的愈合；②緩釋系統(tǒng)釋放的生物活性蛋白對真皮重建有促進(jìn)作用；③簡單易用，成本較低，可用于平戰(zhàn)時的皮膚創(chuàng)傷急救。 方法：首先確定以明膠、殼聚糖、PVA為主要原料混合冷凍干燥制備復(fù)合材料的方法，并進(jìn)一步依據(jù)材料的綜合性能優(yōu)化原料配比工藝并觀察研究其用于皮膚創(chuàng)傷模型的修復(fù)效果。另外，在成纖維細(xì)胞(Fb)的培

4、養(yǎng)上清中分析出有效的生長因子類活性組分并確定其大量提取的工藝，最后結(jié)合明膠微球緩釋系統(tǒng)以期制備成具有促愈合作用的急救類真皮修復(fù)材料。 結(jié)果：明膠、殼聚糖和PVA以5％∶2％∶5％濃度用8∶4∶1的比例混合凍干制備的復(fù)合材料有較好的修復(fù)效果，且MTT實驗結(jié)果顯示材料無明顯細(xì)胞毒性，為最終確定的真皮支架材料的制備方法；采用超濾離心法成功的提取了成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清中的有效活性蛋白，各種檢測結(jié)果表明，上清液中大于10KD的因子組合比較適

5、于真皮Fb的生長，尤其是10～30KD組對其促增殖的表現(xiàn)更有優(yōu)勢；而5～30KD的因子組合更適于對表皮細(xì)胞的生長，尤其5～10KD組對其單純的增殖有著明顯的促進(jìn)作用；采用改良的乳化冷凝法制備了明膠微球(GMS)緩釋系統(tǒng)，對其一般性質(zhì)進(jìn)行了觀測，并發(fā)現(xiàn)其復(fù)合一定濃度的上清因子對Fb有較好的持續(xù)促增殖的作用；在復(fù)合活性蛋白的支架材料對豬皮膚全層缺損修復(fù)作用的研究中，無論從大體觀察還是組織學(xué)觀察，實驗組不但較空白對照組愈合效果明顯，而且已接近

6、自體皮膚移植組的愈合效果。 結(jié)論：明膠、殼聚糖和PVA以適當(dāng)?shù)谋壤旌峡梢試L試作為真皮支架材料；＞10KD的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清組分尤其對真皮的重建有積極的作用，復(fù)合控釋系統(tǒng)后克服了生長因子半衰期短，其進(jìn)入體內(nèi)后迅速擴(kuò)散、變性或酶解，應(yīng)用效果不甚理想的弊病，既可避免毒副作用，又能加快上皮和結(jié)締組織生長；同時加入明膠-殼聚糖-PVA凍干材料這一載體進(jìn)一步加強(qiáng)了對真皮缺損愈合的能力，使之為平戰(zhàn)時皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的臨床應(yīng)用奠定了一定的基礎(chǔ)。