異種CD154基因疫苗抗肝纖維化作用的研究.pdf

1、該研究設(shè)想利用表達(dá)人的CD154分子的真核表達(dá)質(zhì)粒作為疫苗,免疫小鼠產(chǎn)生抗自身CD154分子的抗體,以阻斷CD40-CD154信號(hào),起到抑制細(xì)胞免疫及細(xì)胞因子分泌,以減輕由反復(fù)注射刀豆素蛋白(Concanavalin A,Con A)誘導(dǎo)的肝纖維化的形成.方法采用重組異種同源人的CD154真核表達(dá)質(zhì)粒(pORF-hCD154,p-hCD154)做DNA疫苗,同時(shí)用表達(dá)小鼠自身的CD154質(zhì)粒(pORF-mCD154,p-mCD154)以

2、及空質(zhì)粒(pORF-mcs,p-c)做為同種及空白對(duì)照.首先體外轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞鑒定這些質(zhì)粒在真核細(xì)胞中的產(chǎn)生CD154的能力.大腸桿菌擴(kuò)增大量制備去除內(nèi)毒素的DNA疫苗.Balb/c小鼠尾靜脈反復(fù)注射Con A誘導(dǎo)肝纖維化形成,同時(shí)給予注射DNA疫苗.通過(guò)血清酶學(xué)變化,觀察Con A對(duì)肝細(xì)胞損傷的情況.肝組織病理切片常規(guī)HE、MassonTrichrome染色、銀染觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)、膠原及纖維形成情況.Westernblot及ELISA檢

3、測(cè)血清中產(chǎn)生的抗體對(duì)特異性抗原識(shí)別能力.進(jìn)一步免疫組化分析肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells,HSCs)的標(biāo)記物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-soomthmuscle actin,α-SMA)分析實(shí)驗(yàn)小鼠肝組織內(nèi)激活的HSCs情況.分析血清中細(xì)胞Th1和Th2細(xì)胞因子分泌INF-γ、IL-2、IL-4及IL-10水平,以明確免疫治療后小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫狀況.結(jié)論:綜上所述,p-hCD154基因疫苗免疫小鼠產(chǎn)生了抗h