復方黃芪提取物抗肝纖維化作用機制的研究.pdf

1、慢性肝炎是我國的常見病，威脅著很多人的健康，大多數(shù)患者會發(fā)展成肝纖維化或肝硬化。肝纖維化(Hepatic fibrosis，HF)是多種慢性肝病病情發(fā)展的共同病理基礎(chǔ)，肝臟纖維組織的過度沉積的結(jié)果。近年來研究證實，肝星狀細胞(Hepatic stellate cell，HSC)的活化和向肌成纖維細胞(Myofibroblast，MFB)轉(zhuǎn)化，導致大量細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)的合成，另一方面細胞外基質(zhì)

2、的降解減少導致其合成與降解的不平衡，是肝纖維化發(fā)生的病理關(guān)鍵。TGF-β<,1>是肝纖維化過程中發(fā)揮重要作用，目前研究認為TGF-β<,1>信號經(jīng)由Smad途徑轉(zhuǎn)導入細胞核內(nèi)調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄從而發(fā)揮其生物學效應。 復方黃芪提取物(compotmd astragalus extract，簡稱CAE)是本室根據(jù)中藥現(xiàn)代化組合的復方黃芪有效部位群，研究已證實CAE具有活血化淤、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗肝損傷和抗肝纖維化等作用和抑制HS

3、C增殖、膠原合成、促凋亡、抑制NF-кB活性等機制。我們在此基礎(chǔ)上，采用免疫吸附和Western印記分析等分子生物學方法，進一步研究CAE抗肝纖維化的作用的細胞和分子信號機制，主要內(nèi)容概括如下： 1．CAE抑制HSO來源的MFB細胞增殖作用利用MFB細胞，采用MTT法，建立了血清和細胞因子(TGF-β<,1>)體外刺激MFB細胞增殖的模型。研究了CAE體外抑制MFB細胞增殖的量效和時效關(guān)系。 結(jié)果顯示：(1)CAE(10

4、、20、40、80、160mg/L)呈濃度和時間依賴性地抑制由lO％NBS誘導的MFB細胞增殖。(2)CAE(10、20、40、80、160mg/L)呈濃度依賴性抑制TGF-β<,1>(9pmol/L)誘導的MFB細胞增殖。提示：CAE體外能明顯抑制MFB細胞的活化。 2．OAE對TGF-β<,1>誘導的MFB細胞移行浸潤的影響我們通過體外模擬正常Disse間隙的微環(huán)境及肝纖維化時的相關(guān)改變，采用細胞移行實驗方法，觀察肝纖維化時

5、致纖維化生長因子TGF-β<,1>對MFB細胞移行的影響。 結(jié)果顯示：TGF-β<,1>可促進MFB細胞侵襲能力，而CAE可抑制TGF-β<,1>誘導的MFB細胞的侵襲能力。提示：肝纖維化時Disse間隙微環(huán)境的改變促進了MFB細胞的移行，CAE抑制肝纖維化的作用可能與其抑制MFB細胞移行的作用有關(guān)。 3．CAE抑制HSC來源的MFB細胞的Smad信號轉(zhuǎn)導采用免疫吸附和Western blot方法，觀察CAE對TGF-β

6、<,1>誘導的MFB細胞內(nèi)pSmad2C，pSmad2L，pSmad3L及Smad2/3蛋白表達的影響。結(jié)果顯示：(1)TGF-β<,1>(0.33、1、3、9pmol/L)呈濃度依賴性刺激MFB細胞內(nèi)Smad2C，Smad2L，Smad3L磷酸化；TGF-β<,1>(9pmol/L)在5～30min孵育時間，呈時間依賴性刺激MFB細胞內(nèi)Smad2C，Smad2L，Smad3L磷酸化。(2)TGF-β<,1>(9pmol/L)在30mi