小鼠3T3-L1的培養(yǎng)、鑒定及小檗堿對其增殖分化的影響.pdf

1、第一部分小鼠3T3-L1細胞的培養(yǎng)和鑒定;目的:培養(yǎng)小鼠前脂肪細胞系3T3-L1,并研究在有或無血清環(huán)境下小鼠前脂肪細胞增殖以及分化為成熟脂肪細胞的過程,為激素和細胞因子對前脂肪細胞增殖和分化影響的研究奠定基礎(chǔ).方法:1、在有或無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)小鼠前脂肪細胞3T3-L1,用MTT法觀察其生長狀況和增殖分化過程,繪制出生長曲線.2、觀察小鼠前脂肪細胞分化過程中的形態(tài)學改變.用油紅O染色抽提法測定細胞內(nèi)脂肪含量,繪制油紅O的時間-OD值曲

2、線,觀察小鼠前脂肪細胞分化的過程,并對未分化的細胞和可被油紅O染成紅色的分化的細胞照相.結(jié)果:1、成功地培養(yǎng)了小鼠前脂肪細胞3T3-L1;顯微鏡下觀察小鼠前脂肪細胞3T3-L1形態(tài)類似于成纖維細胞,細胞呈棱形或多角形,細胞核圓形,位于細胞質(zhì)中央,油紅O不能染成紅色.2、在含約10％胎牛血清的培養(yǎng)基中,小鼠3T3-L1細胞接種后15小時細胞基本貼壁,接種后的第3天開始進入對數(shù)增長期,細胞數(shù)迅速增加,到接種后的第9天進入增殖平臺期.3、在無

3、血清條件下,小鼠前脂肪細胞在第4~8天時為對數(shù)增殖期,第8天進入增殖平臺期,至12天細胞開始出現(xiàn)凋亡,數(shù)量逐漸減少.4、油紅O染色顯示,在換用分化培養(yǎng)基4天后,細胞內(nèi)脂肪含量開始迅速增加,與形態(tài)學上細胞單層匯合后4天左右細胞內(nèi)可以見到脂滴相吻合,細胞變成橢圓形或圓形;到2周末分化達到高峰,95％左右的前脂肪細胞可以分化為單脂滴或多脂滴的成熟脂肪細胞.結(jié)論:成功的培養(yǎng)了小鼠前脂肪3T3-L1系,并在無血清培養(yǎng)的狀態(tài)下可以維持前脂肪細胞的增

4、殖,同時可以誘導小鼠前脂肪細胞分化為成熟的脂肪細胞.第二部分小檗堿對小鼠3T3-L1細胞增殖和分化的影響;目的:探討小檗堿對小鼠3T3-L1細胞增殖和分化的影響.方法:培養(yǎng)小鼠3T3-L1細胞,分對照組和小檗堿組.細胞單層匯合后加入小檗堿,72小時進行細胞計數(shù)并照相;換為分化培養(yǎng)基并加入小檗堿后培養(yǎng)至第0、3、6、9、12天時照相觀察細胞形態(tài)的變化,第12天測定油紅O染色的OD值.結(jié)果:1、在細胞單層匯合后,加入小檗堿干預(yù)3天,小檗堿組

5、細胞數(shù)目明顯多于對照組.2、小檗堿組細胞從分化的第3天開始細胞膜局部有小的膨出,第6天細胞內(nèi)可見脂滴,第9天可見成熟脂肪細胞,第12天成熟脂肪細胞的數(shù)目逐漸增多;而對照組從分化的第2天已經(jīng)有細胞形態(tài)的變化,成熟脂肪細胞出現(xiàn)時間明顯早于小檗堿組,數(shù)目也明顯增多.3、小檗堿組在分化的第12天油紅O染色的OD值明顯低于對照組(P<0.01).結(jié)論:小檗堿能夠明顯促進小鼠3T3-L1細胞的增殖而抑制其分化,可能為肥胖2型糖尿病患者的治療提供理論