丁基苯酞對血管性癡呆小鼠海馬神經(jīng)元NF-κB、ICAM-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：血管性癡呆(vasculardementia，VD)是由一系列腦血管疾病，如缺血或出血及急慢性缺氧性腦血管病，導(dǎo)致腦組織損害產(chǎn)生的一種慢性、進(jìn)行性、持續(xù)性智能障礙綜合征，其臨床表現(xiàn)除神經(jīng)系統(tǒng)定位損害的癥狀和體征外，尚有系列異常的神經(jīng)心理癥狀和精神行為，已成為繼阿爾茨海默病(AD)后的第二大癡呆疾病。隨著人口老齡化，VD發(fā)病率逐年上升。VD是迄今為止唯一可防治的癡呆，如早期治療會具有可逆性。因此探索VD發(fā)病的相關(guān)因素及發(fā)病機(jī)制，尋求

2、有效治療措施，具有重要的社會和醫(yī)學(xué)意義。
　　 目前認(rèn)為，慢性腦灌注不足是VD發(fā)病的主要病因，其發(fā)病機(jī)制涉及神經(jīng)生化、分子免疫、遺傳基因等多個方面。隨著炎性機(jī)制在缺血性腦血管病中的地位日益受到重視，越來越多資料表明，炎癥反應(yīng)在腦缺血后繼發(fā)性神經(jīng)損傷中起主要作用，參與了VD的發(fā)生與發(fā)展。炎癥反應(yīng)始于炎癥細(xì)胞黏附、遷移、浸潤、活化以及炎癥因子釋放，各類參與炎癥反應(yīng)的因子既有各自的作用，又相互促進(jìn)和調(diào)節(jié)，形成一個復(fù)雜的炎癥反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)

3、。核因子-ΚB(NF-ΚB)是腦缺血后反應(yīng)最早的炎癥因子，編碼和調(diào)控多種炎癥因子，被認(rèn)為是血管內(nèi)皮細(xì)胞受損的始動機(jī)制之一。而炎癥細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮則依賴于細(xì)胞間粘附因子-1(ICAM-1)等粘附分子，從而進(jìn)入腦組織并進(jìn)一步釋放各種炎癥因子，形成血管源性和細(xì)胞源性腦水腫，加重腦血管病后繼發(fā)性腦組織損傷，導(dǎo)致海馬等腦組織神經(jīng)元損傷、凋亡，最終影響整體認(rèn)知功能。
　　 做為一種可作用于腦缺血多個病理環(huán)節(jié)的多靶點治療藥物，丁基苯酞已廣泛

4、應(yīng)用于腦缺血及VD的臨床治療，但其治療VD的藥理機(jī)制卻尚在探討中。本實驗通過建立VD模型，觀察小鼠海馬NF-ΚB及ICAM-1的變化，探討丁基苯酞改善智能的抗炎藥理機(jī)制。
　　 方法：本研究分為三部分。第一部分以昆明小鼠為研究對象，采用雙側(cè)頸總動脈絲線結(jié)扎方法，經(jīng)連續(xù)三次反復(fù)缺血-再灌注，制備VD模型，并設(shè)立假手術(shù)組、治療組（丁基苯酞）；造模術(shù)后第29d、30d，利用跳臺試驗和水迷宮試驗對各組小鼠分別進(jìn)行學(xué)習(xí)和記憶成績測試，并觀

5、察各組小鼠行為學(xué)差異。第二部分以迅速取材，4％多聚甲醛溶液固定的小鼠腦組織為研究對象，經(jīng)HE染色后觀察各組小鼠海馬組織的病理改變。第三部分采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，在光鏡下觀察各組小鼠海馬組織NF-ΚB、ICAM-1的表達(dá)變化，并計算其海馬CA1區(qū)NF-ΚB及ICAM-1陽性細(xì)胞的平均光密度值，比較各組海馬的表達(dá)是否存在差異。
　　 結(jié)果：(1)跳臺試驗：模型組小鼠學(xué)習(xí)、記憶成績均顯著下降，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)階段的反應(yīng)時間延長（P＜0.

6、05）、錯誤次數(shù)增加(P＜0.05)，記憶階段的潛伏時間縮短（P＜0.05）、錯誤次數(shù)增加(P＜0.05)；治療組較模型組學(xué)習(xí)、記憶成績明顯改善(P＜0.05)，并且與假手術(shù)組比較無明顯差別(P＞0.05)。(2)水迷宮試驗：模型組小鼠學(xué)習(xí)、記憶成績顯著下降，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)階段的游全程時間延長和錯誤次數(shù)增加（P＜0.05），記憶階段的游全程時間延長和錯誤次數(shù)增加(P＜0.05）；治療組較模型組明顯改善（P＜0.05），并且與假手術(shù)組之間無明

7、顯差別(P＞0.05）。(3)海馬HE染色：假手術(shù)組海馬H染色顯示海馬輪廓清楚，錐體細(xì)胞數(shù)量豐富，排列規(guī)則致密，細(xì)胞核圓而大，核仁清晰，神經(jīng)纖維密集；模型組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)目減少，排列松散，細(xì)胞核體積變小，深染，結(jié)構(gòu)不清，呈核固縮表現(xiàn)，神經(jīng)纖維排列紊亂；而治療組病理改變明顯減輕。假手術(shù)組、模型組及治療組各組單位面積正常神經(jīng)元計數(shù)分別為(102.46±13.16)、(61.04±18.17)和(89.09±19.94)。(4)海馬N

8、F-ΚB表達(dá)變化：在光鏡下，假手術(shù)組海馬CA1區(qū)層次清楚，NF-ΚB存在于胞漿中，偶見胞核內(nèi)微弱的陽性表達(dá)。而模型組陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯增加，胞核呈現(xiàn)為棕黃色或黃褐色，排列松散，染色變深。治療組可見陽性神經(jīng)元數(shù)目較模型組減少，排列較致密，染色變淺。假手術(shù)組、模型組及治療組各組陽性細(xì)胞平均光密度值分別為(0.0660±0.00436)、(0.1533±0.01137)、(0.0927±0.00379)，與假手術(shù)組比較，模型組小鼠海馬NF-Κ

9、B陽性神經(jīng)元平均光密度值明顯增加(P＜0.01)，而治療組NF-ΚB陽性神經(jīng)元平均光密度值下降，與模型組比較有顯著差異(P＜0.01)。(5)海馬ICAM-1表達(dá)變化：在光鏡下，假手術(shù)組海馬CA1區(qū)偶爾可見ICAM-1陽性細(xì)胞。而模型組陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯增加，主要為胞漿棕黃染色的細(xì)胞。治療組可見陽性神經(jīng)元數(shù)目較模型組減少，排列較緊密，染色變淺。假手術(shù)組、模型組及治療組各組陽性細(xì)胞平均光密度值分別為(0.0307±0.00416)、(0.

10、139±0.00917)、(0.0833±0.0109)，與假手術(shù)組比較，模型組小鼠海馬ICAM-1陽性神經(jīng)元平均光密度值明顯增加(P＜0.01)，而治療組ICAM-1陽性神經(jīng)元平均光密度值下降，與模型組比較有顯著差異(P＜0.01）。
　　 結(jié)論：(1)本實驗成功地建立了小鼠VD模型，通過跳臺試驗、水迷宮試驗證實了VD小鼠存在學(xué)習(xí)和記憶能力障礙，能夠基本模擬臨床上VD的智能障礙。(2)海馬HE染色顯示海馬錐體細(xì)胞受損，是比較理