P-選擇素基因多態(tài)性與可溶性P-選擇素濃度、非瓣膜性房顫血栓栓塞的相關性研究.pdf

1、一、研究背景 P-選擇素（又稱為顆粒膜蛋白GMP140，血小板激活依賴性顆粒外膜蛋白PADGEM或CD62）是一種黏附分子，屬于選擇素（selectin）家族，主要表達于激活的內皮細胞和血小板表面，介導中性粒細胞-內皮細胞、中性粒細胞-血小板等細胞間反應，存在于靜止血小板α顆粒及內皮細胞的Weibel-Palade小體中，以可溶性P-選擇素（souble P-selectin，sP-selectin）形式出現在血漿中?？扇苄訮

2、-選擇素主要來源于血小板，可以作為血小板激活的標志物。在人血漿里，可溶性P-選擇素已經被證實是血小板活化的產物參與血栓形成。編碼P-選擇素的基因位于人類1號染色體（1q21-24）上一段長50 kb的DNA序列，包含17個外顯子。在ECTIM研究中，確定有13個P-選擇素的基因多態(tài)性：5個分布于啟動子遠端和8個分布于外顯子序列。P-選擇素的基因多態(tài)性可以影響蛋白的肽序列和調節(jié)序列。以往文獻報道P-選擇素基因位點的多態(tài)性，其中包括位于啟動

3、子遠端與許多轉錄因子（包括AP-1、c-Fos13）結合部位的2123 C/G、1817 T/C位點和位于第十三外顯子的Thr715Pro位點，并且研究表明，可溶性P-選擇素水平增高與靜脈血栓栓塞事件的風險及P-選擇素基因Thr715Pro位點的多態(tài)性相關。這些發(fā)現表明了P-選擇素基因多態(tài)性通過調節(jié)血漿可溶性P-選擇素水平促進血栓栓塞事件的形成。眾所周知，心房顫動與血栓栓塞事件的高發(fā)生率密切相關，很可能是存在著血栓前或高凝的狀態(tài)。在血流

4、動力學危險因素中涉及到凝血標志物，某些凝血標志物的基因改變可能增加非瓣膜性心房顫動患者發(fā)生血栓栓塞事件的風險。最近研究表明，a-纖維蛋白原基因Thr312Ala位點多態(tài)性跟心房顫動并發(fā)血栓栓塞的發(fā)病存在著一定聯系?；虻母淖冊谀屠w維蛋白溶解途徑（凝血危險因素）對心房顫動中高凝狀態(tài)的發(fā)展所起的作用尚需進一步的明確。目前，尚未見P-選擇素基因多態(tài)性與非瓣膜性心房顫動患者血栓事件關聯性的研究報告。 二、研究目的 我們的研究

5、以中國華南地區(qū)非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞患者和非瓣膜性房顫患者為研究對象，應用現代分子生物學方法，對目前已知的可能涉及房顫血栓栓塞形成的P-選擇素基因2123C/G、1817T/C、Thr715Pro位點多態(tài)性進行檢測，旨在了解中國房顫人群P-選擇素基因多態(tài)性和可溶性P-選擇素水平及其并發(fā)血栓栓塞事件關聯性的情況，從而在分子水平探索遺傳因素在中國房顫人群血栓栓塞事件發(fā)病中的作用。 三、材料和方法 1．以12導聯心電圖診斷符

6、合心房顫動診斷標準，排除瓣膜性心臟病且經CT或MRI診斷為腦卒中或彩色多普勒超聲診斷為靜脈血栓形成的非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞患者95例（男49例，女46例）和非瓣膜性房顫患者106例（男51例，女55例）為對象，測定相關的臨床指標，包括：高血壓、糖尿病的發(fā)生情況，BMI、血脂水平及纖維蛋白原、C反應蛋白。 2．采用酶聯免疫方法（ELISA）測定入院時血漿中可溶性P-選擇素濃度。 3．用試劑盒提取靜脈血白細胞基因組DNA。

7、P-選擇素的基因型用聚合酶鏈反應及限制性片段長度多態(tài)性法（PCR-RFLP）檢測，比較P-選擇素基因多態(tài)性在兩組中的差異。在此基礎上，分析兩組之間其他實驗指標結果和上述臨床資料。 四、結果 1.房顫并發(fā)血栓栓塞組和對照組臨床特征的比較：病例組在總膽固醇（TC）、C反應蛋白水平顯著比對照組高（P值分別為0．000和0．009）．兩組間平均年齡、性別、體重指數（BMD、有無吸煙、高血壓（HP）、糖尿病、甘油三酯（TG）、高密

8、度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）均無顯著性差異（P>0．05）。 2.P．選擇素基因2123C/G位點基因多態(tài)性與房顫并發(fā)血栓栓塞事件的關系，相對CC基因型而言，GG基因型能顯著增加房顫患者血栓事件發(fā)生的危險性（P<0．05），而1817T/C位點各基因型對血栓栓塞事件的發(fā)生無顯著差異（P>0．05）． 3.非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞組可溶性P-選擇素血清水平與對照組存在顯著性差異（P=0．0

9、00）。 4.可溶性P-選擇素血清水平與總膽固醇、C反應蛋白水平無顯著相關。 5.可溶性P-選擇素血清水平與2123 C/G基因多態(tài)性有顯著相關性，2123C/G多態(tài)性GG基因型者的可溶性P-選擇素血清水平顯著高于GC+CC基因型（P<0．05），房顫并發(fā)血栓栓塞組和對照組P-選擇素基因2123C/G位點的基因型和等位基因分布均有顯著性差異（P值分別為0．020和0．015）。 6.可溶性P-選擇素血清水平與18

10、17T/C基因多態(tài)性沒有顯著性差異（P>0．05），房顫并發(fā)血栓栓塞組和對照組P-選擇素基因1817T/C位點的基因型和等位基因分布無顯著性差異（P值分別為0．443和0．207）。 7.本研究在華南漢族人群中未檢測出Thr715Pro基因多態(tài)性。 五、結論 1.P-選擇素基因2123 C/G位點的基因多態(tài)性與非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞有相關性，GG基因型可能是非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞的易感因素之一。 2.