SAP與高氧肺纖維化及重組腺病毒Ad5-SAP的構(gòu)建.pdf

1、第一部分：
　　 目的:新生兒長時(shí)間吸入高氧可發(fā)生肺纖維化及支氣管肺發(fā)育不良(BPD),已受到廣泛重視,但是高氧在新生兒救治中有重要作用。目前高氧肺纖維化損傷的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。血清淀粉樣物質(zhì)P(SAP)是與纖維化疾病相關(guān)的細(xì)胞因子,本研究采用新生大鼠建立高氧肺纖維化的動(dòng)物模型,動(dòng)態(tài)觀察新生大鼠在高氧暴露后其肺組織的病理改變和外周血SAP水平的變化,了解高氧導(dǎo)致肺纖維化過程中大鼠外周血SAP的水平變化,探討SAP對(duì)高氧肺纖維化的

2、影響。
　　 方法:60只出生12小時(shí)內(nèi)的清潔級(jí)Wistar大鼠(簡稱新生鼠)作為研究對(duì)象。隨機(jī)分成2組:高氧組和空氣對(duì)照組。每組30只,高氧組置于>90％O2,同時(shí)空氣對(duì)照組置于正?？諝庵形桂B(yǎng)。分別于72小時(shí)、7天、14天檢測新生鼠肺組織病理改變及外周血SAP的表達(dá)。
　　 結(jié)果:高氧暴露72小時(shí)后,光鏡下可見肺組織水腫、充血、炎性細(xì)胞浸潤,肺泡內(nèi)有液體滲出及出血；7天時(shí)鏡下見肺間質(zhì)增厚,充血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤仍明顯

3、；14天光鏡下見肺組織炎性損傷減輕,但間質(zhì)增厚,成纖維細(xì)胞增生明顯,肺泡腔縮小,肺間質(zhì)被膠原纖維和纖維細(xì)胞替代,形成肺纖維化。大鼠外周血SAP水平在高氧3天時(shí)稍高于空氣對(duì)照組水平,但在高氧7天時(shí)即明顯下降,低于空氣對(duì)照組水平,14天時(shí)其表達(dá)水平繼續(xù)下降,與空氣對(duì)照組差距增大。
　　 結(jié)論:新生鼠吸入高氧后可導(dǎo)致肺纖維化。長期高氧暴露可導(dǎo)致體內(nèi)SAP水平下降,從而加重新生鼠肺纖維化形成,提示SAP在高氧肺纖維化過程中起了重要作用。

4、
　　 第二部分：
　　 目的:構(gòu)建表達(dá)目的基因SAP的重組腺病毒質(zhì)粒Ad5-SAP,轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞HEK293后收獲高滴度的腺病毒感染液。
　　 方法:能夠表達(dá)目的基因SAP的腺病毒質(zhì)粒用同源重組的方法構(gòu)建,首先通過PCR的方法擴(kuò)增含有設(shè)定酶切位點(diǎn)的目的基因片斷SAP,然后與腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdTrace-TO4連結(jié)即定向克隆,再轉(zhuǎn)導(dǎo)入已含有腺病毒骨架質(zhì)粒.Adeasy-1的感受態(tài)細(xì)菌BJ-Adeasy,二者在細(xì)