咪唑啉1型受體候選蛋白信號轉(zhuǎn)導的研究.pdf

1、咪唑啉1型受體(imidazoline-1receptor，I1R)是近年發(fā)現(xiàn)的一種新型受體，能夠介導許多生理作用。2000年Piletz教授成功地克隆出了咪唑啉受體抗體選擇性蛋白(imidazolinereceptorantiseraselectedprotein，IRAS)，為進一步研究I1R的功能和信號轉(zhuǎn)導過程奠定了基礎。 本研究應用本實驗室已經(jīng)建立的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染IRAS的細胞(CHO-IRAS)，對IRAS偶聯(lián)的信號轉(zhuǎn)導途徑

2、進行了初步研究。經(jīng)典I1R激動劑莫索尼定、利美尼定及其內(nèi)源性配體胍丁胺激活IRAS后并不能顯著提高CHO-IRAS細胞的[35S]-GTPγS結(jié)合量，表明IRAS不與G蛋白偶聯(lián)。利美尼定、莫索尼定及胍丁胺激活IRAS后時間及濃度依賴性地引起磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C(phosphatidylcholineselectivephospholipaseC，PC-PLC)活性升高，且這一作用能被PC-PLC特異性拮抗劑D609及I1R選擇性拮抗

3、劑依法克生所抑制。上述藥物在引起PC-PLC活性升高的同時，也能顯著促進甘油二酯(diacylglyceride，DAG)含量增加。利美尼定、莫索尼定及胍丁胺都能引起細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellularsignal-regulatedkinase，ERK)磷酸化水平發(fā)生改變。利美尼定和莫索尼定可以濃度依賴性地升高ERK磷酸化水平；但胍丁胺對ERK磷酸化有雙重作用，低濃度時(1nM-10nM)降低ERK磷酸化水平，高濃度時(10

4、μM-100μM)促進ERK磷酸化。利美尼定、莫索尼定及胍丁胺對ERK磷酸化的作用能被PC-PLC特異性拮抗劑D609和I1R拮抗劑依法克生所抑制。 本研究首次直接證實IRAS不是G蛋白偶聯(lián)受體。IRAS的信號轉(zhuǎn)導途徑可能是通過活化PC-PLC繼而產(chǎn)生DAG，其后引起了絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，MAPK)酶促級聯(lián)反應過程。本研究為進一步闡明IRAS作為I1R候選蛋白而產(chǎn)生相