n-3HUFA對(duì)西伯利亞鱘親魚(yú)繁殖力及子代發(fā)育和脂肪代謝的影響.pdf

1、西伯利亞鱘(Acipenser baeri Brandt)屬鱘形目(Acipenseriforme)，鱘科，是一類古老的軟骨硬鱗魚(yú)類，在魚(yú)類進(jìn)化史上占有重要地位，有活化石之稱。同時(shí)也是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類養(yǎng)殖品種，產(chǎn)量居世界之首。本研究分別以西伯利亞鱘親魚(yú)及仔稚魚(yú)作為試驗(yàn)對(duì)象，研究飼料中n-3HUFA水平對(duì)親魚(yú)繁殖性能、脂肪代謝、仔稚魚(yú)質(zhì)量的影響以及飼料中不同DHA/EPA比例對(duì)仔魚(yú)早期生長(zhǎng)發(fā)育、脂肪代謝及抗氧化能力的影響，并探索通過(guò)開(kāi)口

2、期營(yíng)養(yǎng)規(guī)劃來(lái)改善其對(duì)低n-3HUFA飼料的利用能力的可能性。本研究?jī)?nèi)容共分為以下四個(gè)部分，分別摘要如下:
　　試驗(yàn)一:西伯利亞鱘PPARα、LPL和HL基因全長(zhǎng)cDNA克隆與序列分析
　　本試驗(yàn)通過(guò)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆西伯利亞鱘（Acipenser bαerii）肝臟中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)、脂蛋白酯酶(LPL)、肝酯酶(HL）基因全長(zhǎng)cDNA序列

3、。結(jié)果顯示:西伯利亞鱘肝臟中PPARα基因(GenBank登錄號(hào)KJ534588) cDNA全長(zhǎng)1736 bp，包括158 bp的5'非翻譯區(qū)、1401 bp的開(kāi)放閱讀框及177 bp的3'非翻譯區(qū);開(kāi)放閱讀框編碼1個(gè)由466個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測(cè)其分子質(zhì)量為52.3 ku，與其他物種的相似性為75.5％～82.4％; LPL基因（GenBank登錄號(hào)KJ720972）cDNA全長(zhǎng)1760 bp，包括163 bp的5'非翻譯區(qū)、15

4、06 bp的開(kāi)放閱讀框及91bp的3'非翻譯區(qū);開(kāi)放閱讀框編碼1個(gè)由501個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測(cè)分子質(zhì)量為57.1ku，與其他物種的相似性為48.7％～67.0％;HL基因（GenBank登錄號(hào)KJ720973）cDNA全長(zhǎng)1740 bp，包括124bp的5'非翻譯區(qū)、1500 bp的開(kāi)放閱讀框及116 bp的3'非翻譯區(qū);開(kāi)放閱讀框編碼1個(gè)由499個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測(cè)分子質(zhì)量為56.4 ku，與其他物種的相似性為55.4％～

5、67.1％。通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)發(fā)現(xiàn)，西伯利亞鱘PPARα與高等脊椎動(dòng)物的親緣關(guān)系較近，LPL、HL與魚(yú)類親緣較近。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)西伯利亞鱘PPARα、HL、LPL基因同源性、系統(tǒng)進(jìn)化地位的分析，為進(jìn)一步研究西伯利亞鱘脂肪代謝調(diào)控機(jī)制奠定了分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　試驗(yàn)二:n-3HUFA對(duì)西伯利亞鱘親魚(yú)繁殖力及其子代生長(zhǎng)發(fā)育的影響
　　本試驗(yàn)設(shè)計(jì)兩種等氮等能的膨化沉性飼料，n-3HUFA的含量分別為2.95％和1.79％，分別命

6、名為H組和L組。分別飼喂雌雄兩種性別的西伯利亞鱘親本，試驗(yàn)周期11個(gè)月。在繁殖期間，記錄親本繁殖性能指標(biāo)，并分別取不同親本來(lái)源的仔稚魚(yú)統(tǒng)計(jì)開(kāi)口期存活率;仔稚魚(yú)根據(jù)親本來(lái)源分為D1（H♀×H♂）、D2（H♀×L♂）、D3（L♀×H♂）、D4（L♀×L♂）4個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，并記錄仔稚魚(yú)期間生長(zhǎng)、存活狀況。試驗(yàn)結(jié)果表明:H組雌性親本的相對(duì)懷卵率、卵重均高于L組，但未達(dá)到顯著水平(P＞0.05);H組魚(yú)卵中n-3HUFA含量顯著高

7、于L組并且H組卵徑顯著高于L組(P＜0.05);H組中雄性親本精子平均曲線運(yùn)動(dòng)速度(VCL)、平均直線運(yùn)動(dòng)速度(VSL)均顯著高于L組(P＜0.05)，精子活率高于L組但未達(dá)到顯著水平，精液密度、平均路徑運(yùn)動(dòng)速度(VAp)、精子平均側(cè)擺幅值(ALH)、精子平均打鞭頻率(BCF)、精子平均移動(dòng)角度(MAD)均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。H組親魚(yú)血清中TC的含量H組與L組差異不顯著(P＞0.05)，TG含量顯著低于L組(P＜0.05)，血

8、清中HDL水平與L組差異不顯著(P＞0.05)，LDL顯著低于L組(P＜0.05)。血清中MDA的濃度試驗(yàn)組顯著低于L組(P＜0.05)，SOD和T-AOC顯著高于L組(P＜0.05)。仔稚魚(yú)D1組和D2組7日齡存活率、30日齡存活率均顯著高于D3組和D4組(P＜0.05); D4組的特定生長(zhǎng)率以及終末均重在各組中最低，且顯著低于D2組(P＜0.05)，其他各組之間差異并不顯著(P＞0.05)。以上試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明:n-3HUFA可以顯著影

9、響西伯利亞鱘雙親的繁殖性能及其仔稚魚(yú)的存活。同時(shí)，對(duì)西伯利亞鱘親魚(yú)脂肪代謝存在積極作用并可以顯著提高其抗氧化能力。
　　試驗(yàn)三:微顆粒飼料中DHA/EPA對(duì)西伯利亞鱘仔稚魚(yú)生長(zhǎng)、脂肪代謝及抗氧化性能的影響
　　本試驗(yàn)的主要目的是研究飼料DHA/EPA對(duì)西伯利亞鱘仔稚魚(yú)生長(zhǎng)、脂肪代謝及抗氧化性能的影響。將西伯利亞鱘仔魚(yú)以800尾/桶的密度隨機(jī)投放于12個(gè)循環(huán)水養(yǎng)殖桶中，隨機(jī)分成4個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，不同處理分別投喂D

10、HA/EPA比例為1.33∶1（R1.33組）、1.86∶1(R1.86組)、2.25∶1（R2.25組）、2.75∶1（R2.75組）的4種等氮等能的微顆粒飼料，實(shí)驗(yàn)周期為32d。試驗(yàn)結(jié)果表明:R2.75組西伯利亞鱘仔稚魚(yú)體長(zhǎng)、終末均重、凈增重、特定生長(zhǎng)率均顯著高于其他三組（P＜0.05）;臟體比、肥滿度及存活率各組之間沒(méi)有顯著性差異;R2.25組和R2.75組稚魚(yú)全魚(yú)CAT活性顯著高于R1.33組和R1.86組。SOD、T-AOC和

11、MDA各組之間沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)。TCH、TG、HDL、LDL各組之間均沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)。內(nèi)臟團(tuán)PPARα、LPL的表達(dá)量各組之間差異不顯著，但R2.25組和R2.75組中HL的表達(dá)量顯著高于R1.33組(P＜0.05)。以上結(jié)果表明:飼料中DHA/EPA為2.75時(shí)，西伯利亞鱘仔魚(yú)的生長(zhǎng)效果最佳;飼料中DHA/EPA比例可以顯著改善西伯利亞鱘鱘仔稚魚(yú)魚(yú)體中脂肪酸組成，并對(duì)其抗氧化能力的提升有一定的影響，但是對(duì)

12、西伯利亞鱘仔稚魚(yú)早期脂肪代謝影響并不顯著。
　　試驗(yàn)四:早期低n-3HUFA刺激對(duì)西伯利亞鱘仔稚魚(yú)生長(zhǎng)、脂肪代謝及抗氧化的影響
　　本試驗(yàn)基于早期營(yíng)養(yǎng)規(guī)劃理論，探索早期低n-3HUFA刺激對(duì)西伯利亞鱘仔魚(yú)生長(zhǎng)及后期抗氧化、脂肪代謝的影響。試驗(yàn)分成兩組，H組飼喂n-3HUFA水平為2.32％的微顆粒飼料，L組飼喂n-3HUFA為n-3HUFA水平為0.54％的微顆粒飼料，兩組飼喂至仔魚(yú)32日齡后，分別采用n-3HUFA水平為2

13、.02％和0.27％的飼料飼喂33-55日齡和56-77日齡階段。試驗(yàn)結(jié)果表明:L組在32日齡的末均重及特定生長(zhǎng)率均顯著低于飼喂高HUFA的H組(P＜0.05)，存活率兩組之間并無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。然而在對(duì)兩組仔魚(yú)飼喂同一種n-3HUFA含量適宜的飼料后(33～55日齡)，L組的特定生長(zhǎng)率和增重率均高于了H組，但末均重還是顯著低于H組。在飼喂低n-3HUFA飼料后（56-77日齡），L組的增重率和特定生生長(zhǎng)率與H組無(wú)顯著差異，

14、H組末均重顯著高于L組(P＜0.05)。32、77日齡仔魚(yú)內(nèi)臟團(tuán)組織勻漿液中抗氧化指標(biāo)兩組之間均無(wú)差異顯著性(P＞0.05)。77日齡魚(yú)體脂肪酸組成中L組DHA、EPA及n-3HUFA總量均顯著低于H組(P＜0.05)。18日齡，H組仔魚(yú)內(nèi)臟團(tuán)中PPARα、HL、LPL基因表達(dá)量均顯著高于L組;32日齡，H組仔魚(yú)內(nèi)臟團(tuán)中LPL基因表達(dá)量均顯著高于L組，PPARα、HL表達(dá)量?jī)山M之間差異不顯著;77日齡，PPARα、HL、LPL在肝臟中的